| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 白腐真菌在环境污染物降解中的应用 | 第11-13页 |
| 1.1.1 云芝 | 第12页 |
| 1.1.2 毛栓菌AH28-2 | 第12-13页 |
| 1.2 细胞色素P450与细胞色素P450还原酶 | 第13-15页 |
| 1.2.1 细胞色素P450 | 第13-14页 |
| 1.2.2 细胞色素P450还原酶 | 第14-15页 |
| 1.3 细胞色素P450还原酶细胞色素P450相互作用 | 第15-16页 |
| 1.4 本课题的主要研究内容及研究目的、研究意义 | 第16-18页 |
| 1.5 本课题技术路线图 | 第18-19页 |
| 第二章 CPR基因的克隆与异源表达 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 基因与载体 | 第19-20页 |
| 2.1.2 仪器与试剂/酶 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.2.1 试剂和溶液的配制 | 第21-23页 |
| 2.2.2 大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.3 获取目的片段 | 第24页 |
| 2.2.4 云芝CPR氨基酸序列分析 | 第24-25页 |
| 2.2.5 构建重组表达质粒pET28-cpr和pET28-cprΔ24 | 第25页 |
| 2.2.6 重组质粒pET28-cpr和pET28-cpr的转化和鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.7 外源蛋白的诱导表达 | 第26页 |
| 2.3 结果 | 第26-30页 |
| 2.3.1 获取目的片段 | 第26-27页 |
| 2.3.2 云芝CPR氨基酸序列分析 | 第27-28页 |
| 2.3.3 重组质粒的转化和鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.4 重组蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 CPRΔ24蛋白的纯化和性质分析 | 第32-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 菌株与蛋白 | 第32页 |
| 3.1.2 仪器/试剂与酶 | 第32-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-39页 |
| 3.2.0 溶液和试剂的配制 | 第34-37页 |
| 3.2.1 镍柱纯化 | 第37页 |
| 3.2.2 分子筛纯化 | 第37-38页 |
| 3.2.3 CPRΔ24比酶活测定 | 第38页 |
| 3.2.4 CPRΔ24酶学特性分析 | 第38-39页 |
| 3.2.5 动力学参数的表征 | 第39页 |
| 3.3 结果 | 第39-44页 |
| 3.3.1 重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3.3.2 酶活测定 | 第40-41页 |
| 3.3.3 酶学特性分析 | 第41-43页 |
| 3.3.4 动力学参数的表征 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 CYP基因Thcyp53-1的克隆与异源表达 | 第46-63页 |
| 4.1 实验材料 | 第46-48页 |
| 4.1.1 菌株与载体 | 第46页 |
| 4.1.2 仪器与试剂/酶 | 第46-48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-58页 |
| 4.2.1 试剂的配制 | 第48-50页 |
| 4.2.2 培养基的配制 | 第50-51页 |
| 4.2.3 E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| 4.2.4 毛栓菌Trametes hirsuta AH 28-2的培养 | 第52页 |
| 4.2.5 毛栓菌Trametes hirsuta AH28-2 RNA的抽提及验证 | 第52页 |
| 4.2.6 毛栓菌Trametes hirsuta AH28-2 RNA的反转录 | 第52-53页 |
| 4.2.7 Thcyp53-1的PCR扩增 | 第53-54页 |
| 4.2.8 Thcyp53-1目的条带的验证及胶回收 | 第54页 |
| 4.2.9 pET-28a载体制备 | 第54页 |
| 4.2.10 载体与基因双酶切 | 第54-55页 |
| 4.2.11 双酶切后的目的基因和载体的胶回收 | 第55页 |
| 4.2.12 构建重组表达质粒pET28-Thcyp53-1 | 第55页 |
| 4.2.13 重组质粒pET28-Thcyp53-1的转化和鉴定 | 第55页 |
| 4.2.14 外源蛋白的诱导表达 | 第55-56页 |
| 4.2.15 重组质粒pET28-Thcyp53-1和分子伴侣质粒pGro7共表达体系的构建 | 第56-57页 |
| 4.2.16 重组质粒pET28-Thcyp53-1和分子伴侣质粒pGro7共表达鉴定 | 第57-58页 |
| 4.3 结果 | 第58-61页 |
| 4.3.1 RNA抽提 | 第58页 |
| 4.3.2 Thcyp53-1的PCR扩增 | 第58-59页 |
| 4.3.3 重组质粒pET28-Thcyp53-1的转化和鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3.4 外源蛋白的诱导表达 | 第60页 |
| 4.3.5 重组质粒pET28-Thcyp53-1和分子伴侣质粒pGro7共表达鉴定 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-63页 |
| 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第71页 |
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