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扶正排毒片对无症状人类免疫缺陷病毒感染者血浆甘露糖结合凝集素的影响

【西医学生毕业论文】作者:姜枫,彭勃,郭会军,李青雅,任伟宏【摘要】 目的观察扶正排毒片对无症状人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者血浆甘露糖结合凝集素(MBL)水平的影响,探讨其可能作用机制。方法检测服用扶正排毒片的无症状HIV感染者服药前、服药后3个月,6个月的血浆MBL水平,并检测健康体检者的血浆MBL作为健康对照,比较服用扶正排毒片前后血浆MBL的变化,并与健康体检者做对照。结果服用扶正排毒片的无症状HIV感染者血浆MBL在入选、治疗3个月、治疗6个月无显著性差异,与健康体检者比较也无显著性差异。结论扶正排毒片对无症状HIV感染者血浆MBL无明显影响,无症状HIV感染者的血浆MBL水平与健康体检者无明显差异,扶正排毒片的作用机制有待进一步研究。
【关键词】 无症状HIV感染者  MBL  中医药 扶正排毒片
Abstract:ObjectiveTo observe the influence of FuZhengPaiDu tablet on asymptomatic HIV carriers,and its mechanism.MethodsDetected the level of plasma MBL in asymptomatic HIV carriers who FuZhengPaiDu tablet at enrolled, 3 th,6 th month,and compared them with those of healty samples.ResultsThere was no significant difference for MBC in asymptomatic HIV carriers who took FuZhengPaiDu tablet before and after treatment,neither in health subjects.ConclusionMBL can not be enhanced significantly after treatment,and there is no significant difference from healthy persons.The mechanism of this drug should be studied further.
Key words: Asymptomatic HIV carriers; MBL; TCM; FuZhengPaiDu tablet
课题组检测无症状HIV感染者服用扶正排毒片后血浆甘露糖结合凝集素的变化,观察该药对其的可能影响。现报道如下。
1 病例选择
1.1 诊断标准
1.1.1 西医诊断标准依照《艾滋病诊疗指南》[1]中无症状HIV感染者标准执行。
1.1.2 中医诊断标准无症状HIV感染者没有特异性症状和证候,故符合西医无症状HIV感染期的诊断标准即可。
1.2 病例选择与退出
1.2.1 病例纳入标准①年龄18~65岁;②符合西医无症状HIV感染期的诊断标准;③200/mm3≤CD4+细胞计数<600/mm3;④未使用抗病毒药物及其它中药治疗者;⑤签署知情同意书。
1.2.2 病例排除标准①严重肝肾功能不全,或合并心脑血管、肺和造血系统等严重原发性疾病,精神病患者;②原发性免疫缺陷患者,激素、化疗等引起的继发性免疫缺陷患者,血液病患者;③妊娠或哺乳期妇女;④对本药过敏者;⑤不符合纳入标准,未按规定用药,或资料不全等影响效果和安全性评价者。
1.2.3 病例退出与脱落标准①有严重不良反应,不能继续观察者;②观察中病情变化,必须改变治疗者;③违背研究方案或服用同类药物者;⑤要求退出、违约或失访的病人。
2 研究方案设计
2.1 试验设计设计方案类型:采用开放式自身前后对照试验。同时检测检测健康体检者血浆MBL作为健康对照。
2.2 病例数量及来源全部病例按整群抽样的方法,选取H省K市W县(区)的HIV/AIDS较多的一个乡,从该乡参加扶正排毒片的病人中选取符合要求的病例进入本研究。
2.3 试验药物名称及服用方法扶正排毒片,河南奥林特药厂生产,0.37 g/片,5片/次(0.37 g×5=1.85 g),3次/d,温开水送服。
2.4 疗程3个月为1个疗程,使用两个疗程。
3 材料与方法
3.1 实验器材MBL Oligomer ELISA 试剂盒,丹麦ANTIBODYSHOP公司,购于深圳晶美公司。Batch:MO-0610CE,MO-0509CE;生物安全柜,美国热电;单道微量移液器,法国GILSON;ARCS-50小型振荡器,天津奥特塞恩斯仪器有限公司;伯乐Model 1575全自动洗板机;伯乐680型酶标仪;Milli-QCentury超纯水系统。
3.2 实验步骤严格按照试剂盒操作步骤进行。
3.3 结果分析使用CurveExpert 1.3软件,输入8个标准品的OD值,建立标准曲线,然后输入各检测样本的OD值,由软件计算输出各样品浓度。软件由深圳晶美上海分公司惠赠。
4 结果
共有20例无症状HIV感染者完成临床观察。有30名健康体检者的血浆标本纳入本研究,标本全部来自河南中医学院第一附属医院,从该院检验科调阅当天体检病人检验结果,满足各项指标正常的标本30份,置于-84℃冷藏备检。20名无症状HIV感染者血浆标本按每管50 μl分装冻存于河南中医学院艾滋病研究所实验中心标本库。两组在性别构成、年龄上基线一致(年龄t=1.839,P=0.075;性别t=0.486,P=0.486),具有可比性。
4.1 治疗组治疗后血浆MBL变化 结果见表1。表1 治疗组治疗前后MBL变化(略)
表1说明治疗组治疗前后血浆MBL无显著性差异,即没有发现扶正排毒片对血浆MBL的明显影响。
4.2 扶正排毒片治疗后不同时间点血浆MBL水平与健康体检对照组的比较见表2。由表2可以看出,治疗组在入选、治疗3个月、治疗6个月与对照组无显著性差异,提示在现有技术条件和样本量及观察周期内,治疗组和对照组在治疗前后血浆MBL水平没有统计学意义上的差异。说明MBL在无症状HIV感染者中的水平与健康体检者没有差异。表2 治疗前后MBL变化及其与对照组比较(略)
  5 讨论
甘露糖结合凝集素(MBL)是补体系统的固有成分,是血清中的一种由肝脏合成的C型凝集素,是钙依赖性糖结合蛋白。MBL可识别和结合病原微生物表面的甘露糖、岩藻糖(fucose)和N-乙酰葡糖胺(N-acetyl-glucosamine,GlcNAc)等糖结构。MBL首先与病原微生物的糖类配体结合随后构象发生变化,激活与之相关联的MBL相关的丝氨酸蛋白激酶(MBL associated serine protease,MASP),两种MASP(MASP1、MASP2)具有与活化的C1s类似的生物学活性,其中MASP2可水解C4和C2分子,MASP1则可直接切割C3,继而形成C3转化酶,然后补体顺序激活,这是补体激活的MBL途径(MBL pathway),在机体的固有性免疫防御中发挥重要作用[2]。Ezekowitz等[3]报道MBL与艾滋病相关。
MBL在艾滋病中的作用基础是MBL能与HIVgpl20蛋白上高表达的甘露糖基结合,并使其唾液酸化,调节二者结合,葡萄糖基化酶抑制剂和神经氨酸酶可促进MBL与gpl20的结合。HIVgp120上高表达的甘露糖基是MBL与HIV作用的关键[4]。MBL在艾滋病中的作用环节可能涉及4个方面:补体活化[5]、调理作用[6]、中和作用[7]和封闭DC-SIGN[8]。关于MBL与艾滋病的相关性研究,主要集中在两方面:艾滋病对MBL水平的影响;MBL水平与艾滋病的进程的相关性。但目前的研究结论不一致。对于艾滋病中的MBL变化,也有待探索。Heggelund等[9]发现在进展期艾滋病,MBL水平是升高的。经过HAART治疗后,MBL水平升高。并且不很快消退。显示在艾滋病中,MBL水平会升高,这可能与HIV感染本身相关,也可能与机会性感染有关。
扶正排毒片是经河南省食品药品监督管理局批准生产的院内制剂(医疗机构制剂临床研究批件号:L2006Z002),由黄芪、西洋参、甘草、连翘等药组成,具有益气健脾、养阴解毒的功效,适合气阴两虚型无症状HIV感染者的治疗。前期在国家十五科技攻关项目(项目编号:2004BA719A13)的研究应用发现该药干预HIV感染者可以改善临床症状、提高其免疫功能,对部分病例还具有降低HIVVL的作用[10,11]。并被列入国家863创新药物研发项目(项目编号:2006AA2Z3382)。但对该药的作用机理尚未开展深入研究。
本研究结果示,在现有技术条件和样本量及观察周期内,扶正排毒片治疗前后血浆MBL水平没有差异,MBL在无症状HIV感染者中的水平与健康体检者没有差异。推测其可能的原因是患者处于无症状HIV感染期时,因为没有机会性感染等外来因素干扰免疫系统,MBL没有激活,也说明MBL在艾滋病中的作用需要进一步深入研究。
【参考文献】
[1]中华医学会感染病学分会艾滋病学组.艾滋病诊疗指南[J].中华传染病杂志,2006,24(2):133.
[2]陈慰峰.医学免疫学,第4版[M].北京:人民卫生出版社,2004:52.
[3]Ezekowitz,R.A.,Kuhlman,M.,Groopman,et al.A human serum mannose binding protein inhibits invitro-infection by the human immunodeficiency virus[J].J.Exp.Med,1989,(169):185.
[4]Hart, M.L., Saifuddin, M., Uemura, K.,et al. High mannose glycans and sialic acid on gp120 regulate binding of mannose binding lectin (MBL) to HIV type 1[J].AIDS Res. Hum. Retroviruses,2002,(18):1311.
[5]Ji X, Gewurz H, Spear GT.Mannose binding lectin (MBL) and HIV[J].Mol Immunol, 2005 Feb;42(2):145.
[6]Saifuddin, M., Hart, M.L., Gewurz, H.,et al.Interaction of mannose-binding lectin with primary isolates of human immunodeficiency virus type 1[J].J. Gen. Virol, 2000,81(4):949.
[7]Ying, H., Ji, X., Hart, M.L.,et al.Interaction of mannose-binding lectin with HIV-1 is sufficient for virus opsonization but not neutralization[J].AIDS Res. Hum. Retroviruses, 2004,(20):327.
[8]Gregory,T.,Spear,M.,Reza,Z.,et a1.Inhibition of DC-SIGN mediated transinfection of T cells by mannose binding lectin.Immunology,2003, 80.
[9]Heggelund, L., Mollnes, T.E., Ueland, T.,et al. Mannose-binding lectin in HIV infection: relation to disease progression and highly active antiretroviral therapy[J].JAIDS. 2003, (32):354.
[10]郭会军,刘学伟,王丹妮.扶正排毒Ⅰ号方治疗无症状HIV感染疗效观察[J].上海中医药杂志,2006,40(1):20.
[11]Peng Bo,Liu Xuewei,Guohuijun. Effect of fuzhengpaidu pian on the changes of CD4+T lymphocytes in early infective phase of asymptomatic human immunodeficiency virus.Journalof linical Rehabilitative Tissue[J].Engineering Researeh,2007,111(33):6712.

 
 
 
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