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大孔吸附树脂富集纯化川牛膝中杯苋甾酮的研究
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【康复西医学论文】【摘要】 目的应用大孔吸附树脂富集纯化川牛膝中有效成分杯苋甾酮。方法川牛膝醇提取液回收乙醇后上大孔吸附树脂柱，以水和不同浓度的乙醇依次洗脱，再用硅胶柱进一步分离纯化。结果杯苋甾酮集中在75%乙醇洗脱部分，且纯度较高，能够最大限度地去粗取精。结论采用大孔吸附树脂方法富集、纯化川牛膝中杯苋甾酮可行。
【关键词】 川牛膝； 杯苋甾酮； 大孔树脂
Abstract：ObjectiveTo enrich and puriy cyasterone in Cyathula officinalis Kuan with macroporous absorptive resins. MethodsThe macroporous absorptive resin columns absorbing the Cyathula officinalis Kuan ethanol extracts were eluted respectively with water and different concentrations of ethanol，then separated and purified with silica gel column chromatography. ResultsThe high-purity of cyasterone concentrated in 75％ alcohol eluant, so macroporous absorptive resins could remove impurities and absorb the essences. Conclusion It is feasible to enrich and purify cyasterone in Cyathula officinalis Kuan with macroporous absorptive resins．
Key words：Cyathula officinalis Kuan； Cyasterone; Macroporous absorptive resin
川牛膝，苋科植物川牛膝Cyathula off icinalis Kuan.的干燥根, 具有逐瘀通经、通利关节、利尿通淋之功效［1］，为著名的川产道地药材。四川省中药研究所陈幸等［2］从中得到杯苋甾酮，并进行了含量测定，但对其分离纯化还未进行深入研究。大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的一类高分子聚合物吸附剂，近年来在天然药物化学成分的提取、分离纯化等方面有了较广泛的应用研究。利用大孔吸附树脂的多孔结构和选择性吸附功能可从中药提取液中分离精制有效成分或有效部位，最大限度地去粗取精［3］。本文探索了以川牛膝为原药材，经过乙醇提取、大孔树脂分离纯化、硅胶柱色谱分离、结晶、干燥，得到高纯度的川牛膝对照品杯苋甾酮（HPLC测定纯度为98.8%）。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪（安捷伦1200）；二极管阵列检测器（DAD）；色谱柱：20RBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 m)。硅胶G，硅胶H （青岛海浪硅胶干燥剂厂），甲醇为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂为分析纯。川牛膝购自四川省成都市西南药都（经鉴定，符合《中国药典》2005年版Ⅰ部川牛膝项下规定）。
2 方法和结果
2.1 提取取川牛膝30 kg，95%乙醇回流提取3次，2 h/次，滤过，减压浓缩，得浸膏5.6 kg。
2.2 大孔树脂预处理取大孔树脂20 kg，95%乙醇浸泡24 h洗脱吸附性杂质后，水洗至pH值至中性；5%盐酸浸泡12 h，水洗至中性；4%氢氧化钠浸泡12 h，水洗至中性，待用。
2.3 大孔树脂分离纯化研究
2.3.1 大孔树脂分离方法把川牛膝浸膏加入到经过预处理的大孔树脂柱上，先用水洗脱至无色，挥干，得浸膏①2300 g。再用75%的乙醇洗脱至无色，减压浓缩回收乙醇，得浸膏②550 g。最后用95%乙醇洗脱至无色，减压浓缩回收乙醇，得浸膏③210 g。
2.3.2 分离浸膏的TLC鉴别取“2.3.1”项下浸膏①，②，③各0.5 g，用10 ml甲醇溶解，作为供试品溶液。另取杯苋甾酮，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。分别吸取上述4种溶液各5 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇（10∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10 %的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。结果见图1。杯苋甾酮集中在75%乙醇洗脱部分。
2.3.3 分离浸膏的HPLC含量测定取原药材提取浸膏0.2 g,浸膏①，②，③约0.1 g,甲醇定容于10 ml的容量瓶中。采用HPLC进行检测，流动相见表1（A甲醇，B 水），色谱图见图2。流速1 ml/min，检测波长243 nm，柱温35℃。表1 高效液相色谱条件（略）
根据薄层鉴别结果和高效液相图谱可知，杯苋甾酮集中在75%乙醇的洗脱部分，此方法能最大限度的提高川牛膝有效成分杯苋甾酮的分离效率。
2.4 后处理
取大孔树脂纯化后的浸膏②,经过硅胶柱进一步纯化和重结晶后得杯苋甾酮结晶，HPLC测定纯度为98.8%。
3 讨论
大孔吸附树脂具有吸附容量大、解吸快、洗脱率高，可重复利用等优点，本实验尝试用大孔吸附树脂分离纯化川牛膝，结果75%乙醇能有效将杯苋甾酮洗脱下来，说明采用大孔吸附树脂分离纯化川牛膝中杯苋甾酮具有很好的效果。此实验方法高效可行。收率稳定，设备投资少，具有良好的应用前景。
【参考文献】
［1］国家药典委员会.中国药典, Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社, 2005: 26.
［2］陈 幸，黎万寿，崔红梅. RPHPLC法测定川牛膝中杯苋甾酮的含量［J］.药物分析杂志，2000，20（4）：234.
［3］王跃生，王 洋．大孔吸附树脂研究进展［J］.中国中药杂志，2006，13(13)：961.
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