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黑曲霉D2-26乳糖酶分离纯化及酶学性质研究

论文目录

1 引言	第1-21页
1．1 乳糖酶简介	第10-11页
1．2 研究乳糖酶的意义	第11-14页
1．2．1 乳糖酶用于解决乳糖不耐症	第11-12页
1．2．2 改良乳制品	第12页
1．2．3 乳清糖浆的制造及应用	第12页
1．2．4 生产低聚半乳糖	第12-13页
1．2．5 制药工业中的应用	第13-14页
1．2．6 乳糖酶在免疫、检测、及环境监测方面的应用	第14页
1．2．7 分析食品中乳糖含量	第14页
1．3 乳糖酶的国内外研究现状及进展	第14-19页
1．3．1 乳糖酶的来源	第14-15页
1．3．2 微生物源乳糖酶的提取纯化	第15-16页
1．3．3 不同微生物来源乳糖酶酶学性质的比较	第16-17页
1．3．4 关于选育、诱变及产酶优化的研究	第17-18页
1．3．5 乳糖酶的固定化及应用	第18页
1．3．6 基因工程技术在乳糖酶生产中的应用	第18-19页
1．4 本研究主要内容和总体目标	第19-21页
2 材料与方法	第21-29页
2．1 试验材料	第21-22页
2．1．1 试验菌株	第21页
2．1．2 主要培养基	第21页
2．1．3 主要试剂	第21页
2．1．4 主要仪器设备	第21-22页
2．2 乳糖酶的发酵生产	第22页
2．2．1 菌种活化	第22页
2．2．2 制备抱子悬液	第22页
2．2．3 乳糖酶的10L发酵罐发酵生产	第22页
2．3 乳糖酶的纯化	第22-23页
2．3．1 粗酶液的制备	第22-23页
2．3．2 超滤浓缩除杂	第23页
2．3．3 硫酸铵分级盐析	第23页
2．3．4 Sephadex G-25脱盐	第23页
2．3．5 离子交换层析	第23页
2．3．6 分子筛层析	第23页
2．3．7 第二次离子交换层析	第23页
2．4 分析测定方法	第23-25页
2．4．1 ONP标准曲线的制备	第23-24页
2．4．2 酶活测定方法	第24页
2．4．3 可溶性蛋白测定	第24-25页
2．4．4 PAGE电泳鉴定乳糖酶纯度	第25页
2．5 乳糖酶酶学性质的测定	第25-29页
2．5．1 温度对酶活性的影响	第25-26页
2．5．2 酶的热稳定性	第26页
2．5．3 酶的低温保存稳定性	第26页
2．5．4 pH对酶活性的影响及酶的pH稳定性	第26页
2．5．5 酶的pH耐受性	第26页
2．5．6 金属离子对酶活力的影响	第26页
2．5．7 其他试剂对酶蛋白的影响	第26页
2．5．8 乳糖酶动力学常数测定	第26-27页
2．5．9 乳糖酶分子量及亚基数的测定	第27页
2．5．10 乳糖酶蛋白糖基化程度的测定	第27-29页
3 结果与分析	第29-40页
3．1 乳糖酶的10L发酵罐发酵生产	第29页
3．2 乳糖酶的分离纯化	第29-34页
3．2．1 粗酶液的制备	第29-30页
3．2．2 超滤	第30页
3．2．3 硫酸铵分级盐析	第30页
3．2．4 脱盐	第30页
3．2．5 离子交换层析	第30-31页
3．2．6 分子筛层析	第31-32页
3．2．7 pH梯度层析	第32-33页
3．2．8 酶的分离纯化结果	第33-34页
3．3 酶学性质	第34-40页
3．3．1 温度对酶活性的影响	第34页
3．3．2 酶的温度稳定性	第34-35页
3．3．3 酶的低温保存稳定性	第35-36页
3．3．4 pH对酶活力的影响	第36页
3．3．5 乳糖酶蛋白的pH耐受性	第36-37页
3．3．6 金属离子对酶活性的影响	第37页
3．3．7 其他试剂对酶蛋白的影响	第37-38页
3．3．8 乳糖酶动力学常数测定	第38-39页
3．3．9 乳糖酶分子量及亚基数的测定	第39页
3．3．10 乳糖酶蛋白糖基化程度的测定结果	第39-40页
4 讨论	第40-44页
4．1 黑曲霉D2-26乳糖酶的分离纯化	第40-41页
4．2 黑曲霉D2-26及其乳糖酶的酶学性质分析	第41-44页
5 结论	第44-45页
6 参考文献	第45-52页
7．在读期间发表的学术论文	第52-53页
8 作者简历	第53-54页
9 致谢	第54页

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