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GRK2基因在奶牛乳腺上皮细胞中的功能研究
 
     论文目录
 
摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 引言第13-27页
   ·牛基因组学的研究第13-16页
     ·基因组遗传图谱第13页
     ·基因组物理图谱第13-14页
     ·基因组DNA测序第14页
     ·功能基因组学研究第14-16页
   ·基因表达谱第16-23页
     ·二代测序技术基础的基因芯片表达谱第16-19页
     ·数字基因表达谱第19-23页
   ·GRK2基因概述第23-25页
     ·G蛋白偶联受体激酶第23-24页
     ·蛋白激酶家族第24页
     ·βARKs第24-25页
     ·GRK2相关功能第25页
   ·研究的目的与意义第25-27页
2 材料与方法第27-54页
   ·实验动物的选取第27页
   ·奶牛乳腺组织获取及总RNA提取第27-29页
     ·主要试剂和耗材第27页
     ·主要仪器第27-28页
     ·乳腺组织的获取第28页
     ·RNA提取第28页
     ·RNA质量检测第28-29页
   ·数字基因表达谱检测第29-30页
     ·实验材料第29页
     ·实验设备与试剂第29页
     ·实验步骤第29-30页
   ·数字基因表达谱数据分析第30-33页
     ·原始数据处理第31页
     ·测序质量评估第31页
     ·测序饱和度分析第31页
     ·实验重复性分析第31页
     ·Clean Tag拷贝数分布统计第31页
     ·基因表达注释第31-32页
     ·差异表达基因的筛选第32页
     ·反义链转录分析第32页
     ·新转录本的检测第32页
     ·GO功能显著性富集分析第32-33页
     ·Pathway显著性富集分析第33页
   ·荧光定量RT-PCR验证第33-37页
     ·基因选取及引物设计第33-35页
     ·cDNA的生成第35-36页
     ·引物效果验证第36-37页
     ·实时荧光定量PCR反应第37页
   ·奶牛乳腺组织的获取及上皮细胞的培养第37-40页
     ·主要试剂及配制方法第37-39页
     ·主要仪器第39页
     ·用于细胞培养的乳腺组织的获取第39页
     ·乳腺上皮细胞的原代培养第39页
     ·细胞传代及纯化第39-40页
     ·乳腺上皮细胞鉴定第40页
   ·功能基因的筛选第40-41页
     ·GRK2在不同状态的奶牛乳腺组织中的表达第40-41页
   ·GRK2基因过表达检验基因功能第41-52页
     ·引物设计及PCR扩增第41-43页
     ·克隆载体构建第43-45页
     ·pGCMV/IRES/EGFP真核表达载体构建第45-47页
     ·重组质粒载体转染奶牛乳腺上皮细胞第47-48页
     ·转染后荧光基团的检测第48页
     ·荧光定量RT-PCR检测GRK2过表达效果第48页
     ·Western blotting检测GRK2过表达对泌乳功能的影响第48-52页
   ·GRK2基因沉默检验基因功能第52-54页
     ·主要试剂第52页
     ·主要仪器第52页
     ·细胞转染第52-53页
     ·干扰效率的观察第53页
     ·荧光定量RT-PCR检测GRK2沉默效果第53页
     ·Western blotting检测GRK2沉默对泌乳功能的影响第53-54页
3 结果第54-85页
   ·奶牛乳腺组织RNA提取质量检验结果第54-55页
   ·数字基因表达谱检测结果第55-57页
     ·差异表达基因第55-56页
     ·Gene Ontology结果第56-57页
     ·Pathway分析结果第57页
     ·新转录本的检测结果第57页
   ·Real-Time荧光定量PCR验证结果第57-66页
   ·奶牛乳腺上皮细胞的培养第66-67页
     ·原代和传代细胞培养第66页
     ·乳腺上皮细胞的鉴定第66-67页
   ·GRK2基因的筛选第67-69页
     ·GRK2基因在各组奶牛乳腺组织中的表达第67-69页
   ·GRK2过表达功能检验结果第69-79页
     ·GRK2基因PCR扩增结果第69-70页
     ·GRK2克隆载体构建结果第70-71页
     ·GRK2表达载体构建结果第71-73页
     ·GRK2过表达效果检验第73-74页
     ·蛋白质水平检测GRK2过表达对泌乳调控的影响第74-79页
   ·GRK2基因沉默功能检验结果第79-85页
     ·GRK2干扰效果检验第79-80页
     ·蛋白质水平检测GRK2沉默对泌乳调控的影响第80-85页
4 讨论第85-90页
   ·奶牛乳腺数字基因表达谱第85-87页
   ·荧光定量RT-PCR验证第87页
   ·Gene Ontology分析第87-88页
   ·Pathway分析第88页
   ·GRK2对乳腺上皮细胞泌乳功能的影响第88-90页
5 结论第90-91页
致谢第91-92页
参考文献第92-98页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第98页

 
 
论文编号BS1954464,这篇论文共98
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