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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--不同PRRSV毒株的分离鉴定、序列及致病性分析
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不同PRRSV毒株的分离鉴定、序列及致病性分析
 
     论文目录
 
致谢第4-9页
英文缩写词表第9-10页
摘要第10-12页
文献综述第12-28页
    1 PRRSV病原学第12-14页
        1.1 PRRSV分类第12页
        1.2 PRRSV形态和理化性质第12-13页
        1.3 抗原性第13-14页
        1.4 体外培养特性第14页
    2 PRRSV分子生物学第14-17页
        2.1 基因组结构与功能第14-15页
        2.2 病毒蛋白第15-17页
            2.2.1 非结构蛋白第15-16页
            2.2.2 结构蛋白第16-17页
    3 流行病学第17页
    4 遗传变异及重组机制第17-21页
        4.1 5' UTR及 3' UTR的变异第17页
        4.2 非结构蛋白编码区的变异第17-18页
        4.3 结构蛋白编码区的变异第18页
        4.4 基因重组第18-21页
            4.4.1 重组类型第18-19页
            4.4.2 重组机制第19-20页
            4.4.3 PRRSV重组第20-21页
    5 致病机理第21-24页
        5.1 抗体依赖性增强作用第21页
        5.2 持续感染第21-23页
        5.3 细胞凋亡第23页
        5.4 免疫抑制第23-24页
    6 诊断方法第24-26页
        6.1 血清学第25页
        6.2 分子生物学第25-26页
    7 疫苗第26-27页
    8 本研究的目的和意义第27-28页
试验一 不同PRRSV毒株的分离鉴定第28-37页
    1 材料与方法第28-31页
        1.1 材料第28-29页
            1.1.1 病料样品第28-29页
            1.1.2 毒株、细胞及抗体第29页
            1.1.3 主要试剂第29页
            1.1.4 主要仪器第29页
        1.2 方法第29-31页
            1.2.1 引物设计第29页
            1.2.2 病料总RNA的提取及RT-PCR检测第29-30页
            1.2.3 病毒分离材料的处理第30页
            1.2.4 病毒分离第30页
            1.2.5 RT-PCR鉴定细胞培养物第30页
            1.2.6 间接免疫荧光试验(IFA)第30-31页
            1.2.7 TCID50测定第31页
    2 结果与分析第31-36页
        2.1 RT-PCR检测出54份阳性样品第31-32页
        2.2 成功获得10株病原分离物第32-33页
        2.3 RT-PCR鉴定均为PRRSV第33-34页
        2.4 IFA鉴定均为PRRSV第34-36页
        2.5 测定出TCID50第36页
    3 讨论第36-37页
试验二 不同PRRSV分离株的NSP2、ORF5基因及部分毒株全基因序列测定及分析第37-50页
    1 材料与方法第38-41页
        1.1 材料第38页
            1.1.1 毒株、菌株及载体第38页
            1.1.2 主要试剂第38页
            1.1.3 主要仪器第38页
        1.2 方法第38-41页
            1.2.1 引物设计与合成第38-39页
            1.2.3 RNA提取第39页
            1.2.4 NSP2及ORF5基因的克隆及测序第39-40页
            1.2.5 NSP2及ORF5基因的遗传变异分析第40页
            1.2.6 全基因组的克隆及测序第40页
            1.2.7 全基因组序列分析第40-41页
    2 结果与分析第41-48页
        2.1 NSP2基因的变异特征第41-43页
            2.1.1 NSP2基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列相似性第41-42页
            2.1.2 NSP2基因推导的氨基酸序列特征第42-43页
            2.1.3 NSP2基因序列的遗传进化特征第43页
        2.2 ORF5基因的变异特征第43-46页
            2.2.1 ORF5基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列相似性第43-44页
            2.2.2 ORF5基因推导的氨基酸序列特征第44-45页
            2.2.3 ORF5基因序列的遗传进化特征第45-46页
        2.3 全基因序列特征第46-48页
            2.3.1 成功拼接出全基因序列第46页
            2.3.2 全基因核苷酸序列相似性第46页
            2.3.3 全基因序列的遗传进化特征第46页
            2.3.4 全基因序列的重组特征第46-48页
        2.4 确定出不同毒株的类型第48页
    3 讨论第48-50页
试验三 不同类型PRRSV分离株的致病性研究第50-61页
    1 材料与方法第51-53页
        1.1 材料第51页
            1.1.1 毒株、疫苗、菌株及细胞第51页
            1.1.2 试验动物第51页
            1.1.3 主要试剂第51页
            1.1.4 主要仪器第51页
        1.2 方法第51-53页
            1.2.1 生长曲线绘制第51页
            1.2.2 试验动物分组与攻毒第51-52页
            1.2.3 临床症状观察、体温变化及平均日增重测定第52页
            1.2.4 qPCR检测病毒血症变化第52页
            1.2.5 ELISA测定PRRSV特异性抗体水平第52-53页
            1.2.6 肺、脾脏病毒载量测定第53页
            1.2.7 肺脏剖检、病变评分及病理切片制作第53页
            1.2.8 不同组别PRRSV毒株回收鉴定第53页
    2 结果与分析第53-59页
        2.1 获得特异性生长曲线第53-54页
        2.2 临床表现、体温变化及平均日增重第54-55页
        2.3 病毒血症变化第55-56页
        2.4 PRRSV特异性抗体水平变化第56页
        2.5 肺、脾脏病毒载量比较第56-57页
        2.6 肺脏剖检、病变评分及组织病理学变化第57-59页
            2.6.1 肺脏剖检及病变评分第57-58页
            2.6.2 肺部组织病理学变化第58-59页
        2.7 不同组别PRRSV毒株回收鉴定第59页
        2.8 不同PRRSV分离株致病性各异第59页
    3 讨论第59-61页
全文总结第61-62页
参考文献第62-70页
ABSTRACT第70-72页

 
 
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