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川芎提取液中川芎嗪与阿魏酸在ＨＰＤ－１００型大孔树脂上吸附－脱吸附动力学研究
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【药学论文参考文献】【摘要】 目的 研究川芎提取液中川芎嗪与阿魏酸在ＨＰＤ－１００树脂上的吸附与脱吸附动力学过程。方法 用ＨＰＬＣ法测定川芎提取液上柱吸附的流出液与洗脱液中川芎嗪与阿魏酸含量，绘制川芎嗪与阿魏酸在ＨＰＤ－１００树脂上的泄漏曲线与洗脱曲线。结果 阿魏酸在ＨＰＤ－１００树脂柱上的泄漏明显较川芎嗪快，但两种成分的脱吸附过程趋于同步。结论 不同成分在大孔树脂上的吸附－脱吸附动力学研究，可为合理确定大孔树脂分离纯化工艺条件（吸附终点与洗脱终点）提供科学依据。
【关键词】 川芎嗪；阿魏酸；吸附－脱吸附动力学；大孔吸附树脂
１ 实验材料
１．１ 仪器
岛津液相色谱仪（日本），ＬＣ－１０ＡＴ ｖｐ色谱泵，ＳＰＤ－１０Ａ ｖｐ紫外检测器，Ｎ３０００色谱工作站；岛津托盘电子分析天平；８０－１型离心机（江苏金坛市中大仪器厂）；９８－１－Ｂ型电热恒温套（天津市泰斯特仪器有限公司）。
１．２ 试剂
ＨＰＤ－１００大孔吸附树脂由沧洲宝恩化工有限公司提供；川芎药材（湖南三湘中药饮片有限公司提供）；盐酸川芎嗪对照品（中国药品生物制品检定所，批号１１０８１７－２００３０５）；阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号０７７３－９９１０）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 树脂的预处理
ＨＰＤ－１００树脂湿法装柱，在树脂柱内加入高于树脂层１０ ｃｍ的乙醇浸泡４ ｈ，放出浸液，至洗涤液在试管中加水稀释不浑浊，洗脱液用紫外光谱扫描不得检出吸收峰为止。再用水洗去乙醇，密封室温保存，备用。
２．２ 川芎药材提取液的制备
取川芎适量，加８倍量水，煎煮１．５ ｈ，滤过；滤渣加６倍量水，煎煮１ ｈ，滤过，合并滤液；８０ ℃以下减压浓缩至提取液含生药１．０ ｇ／ｍＬ，加入９５％乙醇适量使药液含醇量达７０％，静置２４ ｈ，滤过，回收乙醇，将提取液浓缩至含生药１．５ ｇ／ｍＬ，密塞，室温保存，备用。
２．３ 样品溶液中川芎嗪的测定
２．３．１ 色谱条件 Ａｐｏｌｌｏ ５ｕ Ｃ１８－Ａ色谱柱（４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ，５ μｍ）；甲醇－水（５０∶５０）为流动相；检测波长２８０ ｎｍ［３］；流速１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温３０ ℃。理论板数以川芎嗪峰计算不低于５ ０００。
２．３．２ 标准曲线的绘制 精密称取盐酸川芎嗪对照品约１０ ｍｇ，置１００ ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度。精密吸取２．５ ｍＬ溶液置１０ ｍＬ量瓶中，稀释至刻度，混匀，分别精密吸取２、４、８、１２、１６、２０ μＬ，注入高效液相色谱仪，测定其峰面积，以进样量X为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：
Y＝１ ４１６．３３３X＋２ ２５５．３２６， ｒ＝０．９９９ ９
表明川芎嗪在０．０５３～０．５３ ｎｇ具有良好的线性关系。
２．３．３ 供试品溶液的制备与测定 精密量取样品溶液适量，加甲醇稀释５～１０倍，离心３０ ｍｉｎ（２ ５００ ｒ／ｍｉｎ），取上清液用０．４５ μｍ微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定峰面积，以标准曲线法计算样品溶液中川芎嗪的含量。
２．４ 样品溶液中阿魏酸的测定
２．４．１ 色谱条件 Ａｐｏｌｌｏ ５ｕ Ｃ１８－Ａ色谱柱（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ μｍ）；甲醇－１％醋酸水溶液（３５∶６５）为流动相；检测波长；３２０ ｎｍ［４］；流速 １．０ ｍＬ／ｍｉｎ；柱温 ３０ ℃。理论板数以阿魏酸峰计算不低于５ ０００。
２．４．２ 标准曲线的绘制 精密称取阿魏酸对照品约１０ ｍｇ，置１００ ｍＬ量瓶中，加甲醇稀释至刻度。精密吸取２．５ ｍＬ溶液置１０ ｍＬ量瓶中，稀释至刻度，混匀，分别精密吸取１、３、５、７、９、１１ μＬ，注入高效液相色谱仪，测定其峰面积积分值，以进样量X为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：
Y＝３ １２０ ２７６X－３ ４５８．５ ｒ＝０．９９９ ７
表明阿魏酸在０．０３０ ８～０．３３９ ｎｇ具有良好的线性关系。
２．４．３ 供试品溶液的制备与测定 同２．３．３项下操作。
２．５ 动态吸附动力学试验
取川芎药材提取液适量，以２ＢＶ／ｈ的流速通过装有２ ｇ ＨＰＤ－１００湿树脂的玻璃柱（内径１ ｃｍ），每１ＢＶ（即１倍树脂床体积，３ ｍＬ）流出液收集１份，按上述方法测定各份流出液中川芎嗪与阿魏酸的含量，并以上柱前药液的含量计算各份流出液中２种成分的泄漏率（见表１）。以流出液倍床体积（以下简称“体积”）为横坐标，２种成分的泄漏率为纵坐标，绘制阿魏酸与川芎嗪在ＨＰＤ－１００树脂柱上的泄漏曲线，见图１。
２．６ 动态脱吸附动力学试验
取上述动态吸附动力学试验中已吸附饱和的ＨＰＤ－１００树脂柱，先用２ ＢＶ的蒸馏水洗柱，洗去未吸附而附着在树脂上的杂质，再用５０％乙醇溶液以１０ ＢＶ／ｈ流速进行洗脱，每１ ＢＶ流出液收集１份，同上测定各份流出液中川芎嗪与阿魏酸的含量（见表２）。以洗脱液倍床体积为横坐标，洗脱液中２种成分的含量为纵坐标，绘制阿魏酸与川芎嗪在ＨＰＤ－１００树脂柱上的洗脱曲线，结果见图２。
３ 讨论
根据动态吸附动力学试验结果，可知川芎提取液中阿魏酸在ＨＰＤ－１００树脂上的泄漏明显快于川芎嗪，表明阿魏酸在树脂上的吸附性能比川芎嗪要弱。可能是由于阿魏酸的分子量和极性均大于川芎嗪，使其在非极性的ＨＰＤ－１００树脂上的吸附性降低所致。因此，在采用ＨＰＤ－１００树脂富集分离川芎提取液中川芎嗪、阿魏酸时，宜选择吸附性小的阿魏酸作为川芎提取液上柱吸附终点的指标，从而避免上述有效成分在上柱吸附过程中的泄漏损失。依据阿魏酸的泄漏曲线，可确定川芎提取液在ＨＰＤ－１００树脂柱上的吸附终点为流出液达５～６ ＢＶ。
另外，由动态脱吸附动力学试验结果可知，在以５０％乙醇为洗脱溶剂的情况下，阿魏酸与川芎嗪的洗脱曲线形态较为相似，表明两种成分在树脂柱上的脱吸附过程趋于同步。洗脱液达４ ＢＶ时，二者均已基本洗脱完全，故可以此作为洗脱的终点。
综上所述，对中药提取液中不同成分在大孔树脂上的动态吸附与脱吸附动力学进行研究，可为合理确定大孔吸附树脂分离纯化工艺的吸附终点与洗脱终点提供科学依据。
【参考文献】
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［２］ 张 军，王凤云，詹丽玲，等．川芎的超临界ＣＯ２萃取一大孔树脂吸附工艺的研究． 中草药，２００５，３６（８）：１ １６８－１ １６９．
［３］ 薛淑红，柯雪红，王 燕，等． 应用高效液相色谱法对兔玻璃体中盐酸川芎嗪含量的测定． 中国中医眼科杂志，２Ｏ０３，ｌ３（２）；６９－７１．
［４］ 张 慧，裴志东，佟全胜，等．ＨＰＬＣ法测定川芎及制剂中阿魏酸的含量．辽宁中医学院学报，２００５，７（４）；３９４．
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