| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 主要英文缩略词表 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 中国仓鼠卵巢细胞概论 | 第14-15页 |
| 1.1.1 CHO-K1细胞系简介 | 第14页 |
| 1.1.2 基因缺失型突变CHO细胞系简介 | 第14-15页 |
| 1.2 中国仓鼠卵巢细胞在生物学上的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.2.1 遗传学 | 第15页 |
| 1.2.2 重组蛋白主要表达系统 | 第15-17页 |
| 1.2.3 动物细胞无血清培养基 | 第17-20页 |
| 1.3 细胞培养反应器 | 第20-21页 |
| 1.3.1. 搅拌式反应器 | 第20-21页 |
| 1.3.2. 旋转生物反应器 | 第21页 |
| 1.3.3 中空纤维膜生物反应器 | 第21页 |
| 1.4 新的促进CHO生长的TCHM提取物 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究的意义及技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 GLS对CHO细胞生长的影响 | 第24-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.2 药品与试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 灵芝多糖的提取工艺图 | 第26-27页 |
| 2.2.2 水分含量的测定 | 第27页 |
| 2.2.3 细胞复苏、传代和冻存 | 第27-28页 |
| 2.2.4 细胞 2D环境下MTT标准曲线的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.5 MTT法快速检测细胞生长 | 第29页 |
| 2.2.6 数据分析 | 第29-30页 |
| 2.2.7 细胞周期检测 | 第30页 |
| 2.2.8 细胞凋亡检测 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-39页 |
| 2.3.1 不同FBS浓度下Gls对CHO生长的作用 | 第31-33页 |
| 2.3.2 SF培养基下Gls对CHO生长的作用 | 第33-34页 |
| 2.3.3 比较四种培养基组合对CHO-K1细胞生长的影响 | 第34-35页 |
| 2.3.4 血清饥饿胁迫下Gls对CHO-K1细胞周期的影响 | 第35-36页 |
| 2.3.5 β-D-葡聚糖多糖对CHO-K1细胞增殖的影响 | 第36-38页 |
| 2.3.6 药物Gls在血清饥饿下CHO-K1细胞胁迫抗凋亡 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-41页 |
| 第三章 稳定表达GFP的CHO-K1细胞株的构建 | 第41-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-43页 |
| 3.1.1 实验菌株与细胞系 | 第41页 |
| 3.1.2 药品与试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.3 仪器与设备 | 第42-43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 pEGFP-N2转化大肠杆菌DH5α 的构建 | 第43页 |
| 3.2.2 pEGFP-N2测序 | 第43页 |
| 3.2.3 提取去除内毒素转染的pEGFP-N2 | 第43-44页 |
| 3.2.4 pEGFP-N2定量和定性分析 | 第44页 |
| 3.2.5 脂质体Lipofetamine 3000转染 | 第44页 |
| 3.2.6 G418药物毒性试验 | 第44-45页 |
| 3.2.7 稳定细胞株的获取 | 第45页 |
| 3.2.8 抗性细胞克隆PCR鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.9 Gls对GFP蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.10 检测与分析方法 | 第47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-55页 |
| 3.3.1 pEGFP-N2质粒的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.2 去除内毒素转染的pEGFP-N2定量分析 | 第48页 |
| 3.3.3 脂质体lipofectamine 3000试剂转染剂量和时间的确定 | 第48-49页 |
| 3.3.4 G418最佳浓度筛选 | 第49-50页 |
| 3.3.5 单克隆挑选与验证 | 第50-51页 |
| 3.3.6 静态培养Gls对GFP蛋白表达量的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.7 旋转瓶放大培养验证Gls对GFP蛋白表达量的影响 | 第52-53页 |
| 3.3.8 评价四种培养基的成本和经济效益 | 第53-55页 |
| 3.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 以稳定表达GFP蛋白的CHO-K1细胞系筛选无血清培养基 | 第56-69页 |
| 4.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第56-57页 |
| 4.1.2 药品与试剂 | 第57页 |
| 4.1.3 仪器与设备 | 第57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-60页 |
| 4.2.1 细胞复苏及培养 | 第57-58页 |
| 4.2.2 细胞驯化 | 第58页 |
| 4.2.3 大豆蛋白胨、维生素C及其还原型谷胱甘肽溶液的制备 | 第58-59页 |
| 4.2.4 荧光孔板培养筛选添加物浓度 | 第59页 |
| 4.2.5 MTT快速检测其他细胞系的生长 | 第59页 |
| 4.2.6 数据分析 | 第59-60页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第60-68页 |
| 4.3.1 细胞驯化及其验证 | 第60-61页 |
| 4.3.2 soya peptone溶液对CHO细胞生长的作用 | 第61-62页 |
| 4.3.3 GSH对CHO细胞生长的作用 | 第62-64页 |
| 4.3.4 Vc对CHO细胞生长的作用 | 第64-65页 |
| 4.3.5 SVG培养基对CHO细胞生长的作用 | 第65-67页 |
| 4.3.6 SVG培养基对其他细胞系生长的作用 | 第67-68页 |
| 4.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 结论与展望 | 第69-72页 |
| 1 结论 | 第69-70页 |
| 2 展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附件 | 第82页 |
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