| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 氨基酸名称对照表 | 第8-9页 |
| 一、前言 | 第9-40页 |
| 1 世界和我国能源现状及未来发展趋势 | 第9-11页 |
| ·世界能源现状 | 第9-10页 |
| ·我国能源现状及出路 | 第10-11页 |
| 2 由生物质能产乙醇的应用历史背景及意义 | 第11-18页 |
| ·由生物质能产乙醇的应用历史背景 | 第11-12页 |
| ·由生物质能产乙醇的应用的意义 | 第12-18页 |
| 3 世界各国乙醇生产现状 | 第18-19页 |
| 4 乙醇发酵的微生物 | 第19-23页 |
| ·传统工业上发酵葡萄糖产乙醇的酵母及其代谢途径及其问题 | 第19-20页 |
| ·戊糖发酵生产乙醇的酵母及代谢途径 | 第20-22页 |
| ·发酵木质纤维素水解产物的酵母的改良 | 第22-23页 |
| 5 酵母菌的代谢工程及国内外已构建的酵母基因工程菌 | 第23-36页 |
| ·酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) | 第24-34页 |
| ·表达xyl1和xyl2酿酒酵母工程菌 | 第24-32页 |
| ·表达细菌XI基因的酿酒酵母工程菌 | 第32-33页 |
| ·原生质体融合技术构建酿酒酵母工程菌 | 第33-34页 |
| ·树干毕赤酵母(Pichia stipitis) | 第34-35页 |
| ·巴氏毕赤酵母(Piahia pastoris) | 第35页 |
| ·我国该领域的发展现状 | 第35-36页 |
| 6 发展前景 | 第36-37页 |
| 7 本实验技术路线 | 第37-39页 |
| 8 本研究的特点和意义 | 第39-40页 |
| 二、材料和试剂 | 第40-44页 |
| 1 实验材料 | 第40页 |
| 2 试剂盒 | 第40页 |
| 3 培养基 | 第40-42页 |
| 4 酶,抗生素及试剂 | 第42-43页 |
| 5 溶液配制 | 第43页 |
| 6 主要实验仪器 | 第43-44页 |
| 三、方法和步骤 | 第44-57页 |
| 1 重组酿酒酵母的发酵实验 | 第44-46页 |
| ·带有xyl1基因的重组的发酵实验 | 第44-45页 |
| ·重组S.cerevisiae YS58-P12的发酵实验 | 第45页 |
| ·高效液相分析糖浓度 | 第45-46页 |
| ·气相色谱分析乙醇浓度 | 第46页 |
| 2 酵母染色体DNA的提取 | 第46-47页 |
| 3 目的基因的获得: | 第47-51页 |
| ·、引物设计: | 第47-48页 |
| ·扩增xyl1的PCR反应条件及程序 | 第48-49页 |
| ·xyl2基因的扩增 | 第49-50页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第50页 |
| ·PCR产物的纯化回收(PCR产物纯化试剂盒) | 第50-51页 |
| 4 目的基因的克隆 | 第51-57页 |
| ·目的基因与T载体的连接 | 第51-52页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第52页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌宿主菌 | 第52页 |
| ·重组质粒的筛选和菌落PCR | 第52-53页 |
| ·重组质粒的提取 | 第53-54页 |
| ·重组质粒的酶切验证 | 第54-55页 |
| ·目的基因xyl1、xyl2的测序验证,以及完整的xyl1基因片断和部分pACT2-xyl1和pDR195质粒序列的测序验证 | 第55-56页 |
| ·目的片段的回收、纯化 | 第56页 |
| ·带有部分pDR195序列重组酵母表达载体pDY的构建 | 第56页 |
| ·目的基因与酵母表达载体pACT2和pDR195的连接 | 第56-57页 |
| ·重组酵母表达载体及测序载体的导入 | 第57页 |
| 四、结果与分析 | 第57-71页 |
| 1 重组酿酒酵母的发酵试验 | 第57-63页 |
| ·酿酒酵母YS58-1的发酵试验 | 第57-59页 |
| ·酿酒酵母YS58-12的发酵试验 | 第59-61页 |
| ·重组酿酒酵母YS58-1、YS58-12和原始菌株YS58在2%木糖+3%葡萄糖培养基上的木糖利用率和乙醇产量的比较 | 第61-63页 |
| 2 Candida Shehatae木糖还原酶基因(xyl1)的克隆及表达载体pACT2-xyl1的构建 | 第63-66页 |
| ·Candida Shehatae木糖还原酶基因(xyl1)的克隆 | 第63-64页 |
| ·重组酵母表达载体pACT2-xyl1的构建 | 第64-66页 |
| ·含有完整启动子和终止子木糖还原酶基因(xyl1)的克隆 | 第66页 |
| 3 Saccharomyces cerevisiae木糖醇脱氢酶基因xyl2的克隆及重组载体pDR195-xyl2的构建 | 第66-68页 |
| ·Saccharomyces cerevisiae木糖醇脱氢酶基因xyl2的克隆 | 第66-67页 |
| ·重组酵母表达载体pDR195-xyl2的构建 | 第67-68页 |
| 4 测序载体pDY的构建 | 第68-69页 |
| 5 讨论 | 第69-71页 |
| 五、结论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
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