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灵芝孢子粉和双歧杆菌对小鼠菌群失调的治疗作用

【中医学免费毕业论文下载】作者:崔冬冰,左丽, 陈阿英, 龙世棋, 钟志强【摘要】 目的: 研究灵芝孢子粉(GSP)、双歧杆菌(BB)对小白鼠肠道菌群失调的治疗作用。方法: 用盐酸林可霉素注射液给实验小鼠灌胃0.36 g/kg连续6 d,建立小鼠菌群失调模型。将小鼠随机分成11组,每组10只,包括一个正常对照组(CG),一个菌群失调模型组(MIG)和9个治疗组(根据不同剂量和治疗方法建立的3个GSP治疗组,3个BB治疗组以及3个共同治疗组)。连续6 d后,处死小鼠,取直肠粪便并用生理盐水稀释成1×10-7、1×10-8、1×10-9三个稀释度,行有氧及厌氧培养48 h后作菌落计数,数据进行统计学处理。结果: 成功建立了小鼠肠道菌群失调模型,MIG组的需氧菌和厌氧菌菌落计数均低于CG组,并且在经过GSP和BB治疗后小鼠肠道菌群数量明显得到恢复,其中高剂量灵芝孢子粉和高剂量双歧杆菌治疗组的效果最好,与CG组及相应中、低剂量组比较有统计学意义(P<0.05)。结论: GSP和BB对治疗因抗生素引起的肠道菌群失调有显著的作用。
【关键词】 灵芝 双歧杆菌感染 细菌 需氧 细菌 厌氧 直肠 小鼠
[Abstract] Objective: To investigate the effect of Ganoderma spore powder (GSP) and bifidobacteria (BB) on the intestinal microflora imbalance of mice.Methods: The mouse model of intestinal microflora imbalance were established by intragastric administration of lincomycin hydrochloride injection at a dose of 0.36g/kg for 6 days. The mice were randomly divided into 11 groups (10 mice in each) including one normal control group (CG), one microflora imbalance model group (MIG) and 9 treatment groups (3 for GSP, 3 for BB, and 3 for their combination in terms of different dosages and treating programs). In 6 days of treatment, mice were killed and intestinal dejection was collected and diluted with asepsis NS into three different concentrations: 1×10-7, 1×10-8, and 1×10-9. The dejection dilutions were cultivated for 48 hours under oxygen or anoxic conditions and the obtained bacterial colonies were counted. Data were statistically analyzed with variance analysis method. Results: The model of mice with intestinal microflora imbalance was successfully established. The colony numbers of both aerobic bacteria and anaerobic bacteria in MIG were less than those of CG, and the colony numbers in microflora imbalanced mice increased after the treatment of GSP or BB. In groups treated with high dosages of GSP or BB, the best curative results were obtained and significantly different from those of CG and groups received low dosages (P<0.05). Conclusions: GSP and BB have obvious therapeutic effect on intestinal microflora imbalance of mice .
[Key words] Gardenia;bifidobacteriales infections;bacteria, aerobic;bacteria, anaerobic; rectum; mice
由于广谱抗生素种类的不断增多以及在临床上的不合理使用,抗生素在杀灭细菌的同时也破坏了肠道内菌群之间的正常关系,使其失去平衡,引起肠道菌群失调[1]。菌群失调会导致肠道正常菌无法合成维生素,影响蛋白质、糖、脂肪的消化吸收,同时可直接刺激肠道蠕动加快,使正常小肠细菌菌种分布变窄及数量减少而诱发抗生素相关性腹泻。菌群失调常规治疗除采取支持治疗和停用诱发腹泻的抗生素外,口服益生菌已成为防治的有效手段[2]。2006年4月~2007年9月给小鼠经口灌胃灵芝孢子粉、双歧杆菌及两者的混合物,研究两种药物对小鼠肠道菌群失调的治疗作用。
1 材料与方法
1.1材料
盈康活胶囊制剂(含全破壁纯赤灵芝孢子),由上海第二医科大学及盈康科技控股国际有限公司联合研究,香港天维健康产品国际有限公司生产。盐酸林可霉素注射液(0.3 g/ml) 由福建省福清药业有限公司生产,MRS培养基、普通肉汤琼脂培养基。
1.2 动物
健康 6~8周龄昆明种小鼠 110只 ,体重(20±2) g ,雌雄随机,由贵阳医学院动物实验中心提供。
1.3 实验方法
110只小鼠随机分成11组,每组10只。正常对照组:用无菌生理盐水(NS)灌胃0.7 ml/d, 连续12 d;菌群失调模型组:用10 g/L抗生素给小鼠灌胃 0.7 ml/d,连续6 d,再用蒸馏水灌胃0.7 ml/d,连续6 d;灵芝孢子治疗组30只:按菌群失调造模后,用高(35%)、中(5%)、低(2.5%)三种浓度的灵芝孢子液给小鼠灌胃0.7 ml/d,持续6 d;双歧杆菌治疗组30只:按菌群失调造模后,采用三种浓度的双歧杆菌液高(35%)、中(17.5%)、低(8.75%)给小鼠灌胃;灵芝孢子和双歧杆菌共同治疗组30只:按菌群失调造模后,将高剂量灵芝孢子液与高剂量双歧杆菌液等量混合,再依次对倍稀释,配制成高、中、低三种浓度灌胃小鼠。
1.4 检测指标
观察记录各组小白鼠的活动状态、进食量、粪便形状。各组小鼠颈椎脱臼处死,取直肠成型粪便,无菌NS混合稀释后行有氧及厌氧培养48 h后作菌落计数,换算成对数值。SPSS软件12.0 方差分析(LSD法)实验结果。
2 结果
2.1 一般状态
小鼠在给予抗生素灌胃6 d后,进食量减少,粪便含水量明显增加,有腹泻症状;各个治疗组治疗后,粪便含水量明显减少,腹泻症状减轻。
2.2 肠道菌群
由表1可知,经抗生素灌胃后的小鼠肠道中的需氧菌和厌氧菌菌落数明显减少,低于正常对照组,有显著差异性(P<0.01)。由表2可知,用不同剂量的灵芝孢子粉、双歧杆菌及二者混合物治疗后,各治疗组菌落数(需氧菌和厌氧菌)都较模型组多,说明模型小鼠在经过灵芝孢子粉、双歧杆菌及二种混合物治疗后,其肠道内的细菌数有所恢复。灵芝孢子粉治疗高剂量组比中、低剂量组的菌落数(需氧菌和厌氧菌)更多,与对照组及中、低剂量组比较,有显著差异性(P<0.05);双歧杆菌治疗高剂量组也较其中、低剂量组的效果好,与对照组及中、低剂量组比较,有显著差异性(P<0.05)。但是混合治疗高剂量组与中、低剂量组比较效果则不明显,P>0.05。各剂量组的需氧菌和厌氧菌比较,厌氧菌数明显多于需氧菌数,有显著差异性(P<0.05)。表1 盐酸林可霉素对小鼠肠道菌的影响(略)注:(1)与正常对照组相比P<0.05。表2 灵芝孢子和双歧杆菌对小鼠肠道菌的影响(略)注:(1)与灵芝孢子中、低治疗组相比,P<0.05;(2)与双歧杆菌中、低治疗组相比,P<0.05;(3)与共同治疗中、低组相比,P<0.05;(4)与同药物同剂量的需氧菌比较,P<0.05。
3 讨论
人体肠道中生存着100万亿种微生物,包括细菌、真菌、病毒、原虫等,而对机体有益的仅有10~20种,如拟杆菌属、乳酸杆菌属、梭状芽孢杆菌属、双歧杆菌属、埃希菌属等。这些生理菌群数量在一定范围波动时,能维持正常的生理和免疫功能,具有对抗外籍菌定植的能力,即定植抗力。同时,生理菌群还参与蛋白、糖、脂肪的消化吸收、合成维生素等,对宿主有营养作用,对亚硝胺等致癌物质有降解的功能而起抗癌作用。生理菌群构成了人体的正常微生态环境[3]。大量抗生素使用后,肠道生理菌群(乳酸杆菌、双岐杆菌等)受到抑制,对肠道有害菌(难辨梭菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌等)的拮抗作用减弱,使这些细菌在结肠定植、繁殖而导致结肠炎和腹泻。另外,某些抗生素还可直接引起肠黏膜损害、肠上皮纤毛萎缩、细胞内酶的活性降低或与肠道内胆汁结合或直接促进肠蠕动而导致腹泻[4]。
微生态制剂可调整肠道菌群失调,避免抗生素带来的种种不良反应,恢复肠道内的微生态平衡[5,6]。双歧杆菌经口服后,可与肠道内其它厌氧菌一起占据肠黏膜表面,构成生物学屏障,形成定植抗力,从而阻止致病菌和条件致病菌的定值入侵。此外,双歧杆菌通过发酵葡萄糖可产生大量醋酸、乳酸 ,使肠道 pH 值降低,从而抑制一些致病性细菌,如伤寒杆菌、痢疾杆菌、铜绿假单孢菌、变形杆菌以及真菌等致病菌的生长;并且它还可以合成细胞外糖苷酶,降解肠黏膜上皮细胞上的复杂多糖,从而阻止肠道内潜在致病菌及其毒素对肠黏膜上皮细胞的黏附[7,8]。此外,双歧杆菌在肠内可合成多种维生素和生物酶,如维生素 B1 、维生素B2 、维生素B6 、维生素B12 、维生素K1 、尼克酸和叶酸等;另外,双歧杆菌可通过产酸使肠道酸化,有利于 Fe2+、Ca2+及维生素D 等营养物质的吸收。此外,双歧杆菌还具有清除自由基、抗氧化、增强机体免疫力、减少诸多肠源性有害物质,如酚、氨、苯乙醇胺、吲哚、硫化氢等生成[1,2]。在菌群失调的情况下,及时补充双歧杆菌可促进肠道功能恢复,减少相关疾病的发生。
灵芝是食药两用真菌,中医认为灵芝有滋补、健脑、强身、消炎、利尿、益胃等功效。现代医学研究表明,灵芝安全无毒、无副作用,具有抑制肿瘤作用、调节免疫功能,促进骨髓细胞蛋白质、核酸合成代谢,对放射性损伤有保护作用,减轻化学药物对肝脏的损伤,加强肝脏代谢药物的降毒功能,降血糖及清除自由基作用[9,10]。灵芝孢子是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来极其细小的孢子,是灵芝的生殖细胞,具有灵芝的全部遗传活性物质。此外,它还具有调理肠胃作用,使肠道内益生菌增殖,从而纠正和预防抗生素引起的小鼠肠道菌群失调[11]。
本实验通过给小鼠经口灌胃抗生素的方法建立小鼠肠道菌群失调模型[12],模型组小鼠出现进食量减少、活动量降低、粪便含水量增加等肠道菌群失调症状,肠道菌落数(需氧菌和厌氧菌)明显低于正常对照组,说明抗生素的使用引起了实验小鼠肠道菌群失调。模型建立后分别给予小鼠不同浓度的灵芝孢子粉、双歧杆菌以及二者的混合物进行治疗后,小鼠肠道需氧菌和厌氧菌的数量均有增加,其中高剂量灵芝孢子粉和高剂量双歧杆菌治疗后的效果明显,甚至恢复到正常值。说明高剂量的灵芝孢子粉和双歧杆菌对于恢复肠道内的厌氧菌数量具有较强的作用,而当灵芝孢子粉和双歧杆菌二者的浓度降低,或用低浓度制成的混合物治疗时效果则不理想,说明这两种药物的治疗效果与它们的浓度有着密切的关系。另外,无论是单独使用还是混合使用,灵芝孢子粉和双歧杆菌对于恢复小鼠肠道内的厌氧菌的效果较好,一方面补充的双歧杆菌增加了肠道中厌氧菌的数量;另一方面,灵芝孢子粉促进了肠道内益生菌尤其是厌氧菌的增殖,提高了其在肠道内的定植抗力,恢复了肠内正常微生态环境。研究表明,灵芝孢子粉和双歧杆菌对治疗因抗生素所引起的肠道菌群失调确实有明显效果,能够使肠道中的优势菌群数量得以恢复,从而纠正了因抗生素引起的菌群失调症状。
【参考文献】
[1]陈静.双歧杆菌片口服预防小儿肺炎继发腹泻探讨[J].四川医学, 2008(11):58-59.

 
 
 
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