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利用重组大肠杆菌合成几丁寡糖及其衍生物的研究
 
     论文目录
 
中文摘要第1-15页
ABSTRACT第15-20页
第一章 绪论第20-44页
   ·前言第20页
   ·糖生物学的发展第20-21页
   ·寡糖的制备技术第21-24页
     ·化学合成法第21-22页
     ·多糖降解法第22-24页
     ·酶法合成寡糖技术第24页
   ·利用重组大肠细菌进行寡糖合成的研究进展第24-34页
     ·细菌糖基转移酶的来源及克隆第25页
     ·糖核苷酸的供给第25-29页
     ·寡糖合成途径的构建第29-33页
     ·研发前景及存在的问题第33-34页
   ·结瘤因子的活性及其生物合成第34-39页
     ·根瘤菌的分类及豆科植物的固氮机理第34页
     ·结瘤因子的结构及其生物合成第34-37页
     ·NodC蛋白的研究进展第37-38页
     ·NodB蛋白的研究进展第38-39页
   ·UDP-GlcNAc在细菌细胞内的代谢途径第39-40页
   ·立题依据和研究意义第40-43页
     ·立题依据第40-42页
     ·本论文研究的意义第42-43页
   ·论文的主要研究内容和拟解决的关键问题第43-44页
     ·研究内容第43页
     ·拟解决的关键问题第43-44页
第二章 重组nodC基因的克隆和表达载体的构建与筛选第44-71页
   ·引言第44页
   ·试验材料第44-52页
     ·菌株第44-45页
     ·基因、质粒和引物第45-50页
     ·分子克隆用酶和试剂第50-51页
     ·培养基第51页
     ·溶液第51-52页
   ·主要仪器第52-53页
   ·试验及分析方法第53-58页
     ·根瘤菌基因组的提取第53页
     ·目的基因的琼脂糖凝胶回收第53-54页
     ·目的基因与载体的限制性内切酶消化反应第54-55页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第55页
     ·目的基因与载体的连接反应第55页
     ·大肠杆菌转化试验第55-56页
     ·重组大肠杆菌的三角瓶振荡培养第56页
     ·培养液和重组大肠杆菌细胞中几丁寡糖含量的测定第56-57页
     ·重组大肠杆菌培养液细胞干重含量的测定和计算第57-58页
   ·结果与讨论第58-69页
     ·不同大肠杆菌菌株对几丁寡糖合成的影响第58-60页
     ·重组nodCL基因克隆第60-63页
     ·不同nodCL表达载体的产糖能力的测定结果第63-66页
     ·NodCM表达载体pUC-CM3的构建第66-68页
     ·重组nodC基因对寡糖合成的影响第68-69页
   ·本章小结第69-71页
第三章 利用重组大肠杆菌合成几丁寡糖的研究第71-97页
   ·引言第71-72页
   ·试验材料第72-73页
     ·菌株第72页
     ·培养基第72-73页
     ·主要试验试剂第73页
   ·主要试验仪器第73-75页
   ·试验及分析方法第75-80页
     ·重组大肠杆菌的三角瓶振荡培养第75页
     ·10 L发酵罐非补料模式的培养方式第75页
     ·10 L发酵罐补料模式的同步法培养方式第75页
     ·10 L发酵罐补料模式的二步法培养方式第75-76页
     ·培养液中重组大肠杆菌细胞干重的测定方法第76页
     ·培养液上清中N-乙酰氨基葡萄糖含量的测定第76页
     ·重组大肠杆菌细胞内几丁寡糖浓度的测定方法第76页
     ·重组大肠杆菌培养液中UDP-GlcNAc浓度的测定第76-78页
     ·寡糖产物的分离纯化及产物鉴定第78-80页
   ·结果与讨论第80-93页
     ·培养基组分对重组大肠杆菌生长和几丁寡糖合成的影响第80-81页
     ·不同乙酰氨基葡萄糖添加水平的培养结果第81-82页
     ·不同培养基对细胞内UDP-GlcNAc浓度的影响第82-84页
     ·DCL3的同步法发酵结果第84-86页
     ·DCL3的二步法发酵结果第86-87页
     ·几丁寡糖产物的分离纯化鉴定第87-93页
   ·本章小结第93-97页
第四章 利用重组NodC大肠杆菌合成几丁寡糖衍生物的研究第97-115页
   ·引言第97页
   ·材料和方法第97-101页
     ·菌株第97页
     ·主要实验仪器与试剂第97-98页
     ·培养基第98页
     ·试验方法第98-101页
   ·结果与讨论第101-113页
     ·几丁寡糖烯丙基衍生物合成的发酵培养结果第101-102页
     ·几丁寡糖甲基衍生物合成的发酵培养结果第102-103页
     ·培养液测定结果第103-105页
     ·活性炭吸附洗脱的纯化试验结果第105-106页
     ·P-4凝胶层析纯化结果第106-107页
     ·几丁寡糖产物的HPLC分析结果第107-109页
     ·制备液相分离纯化结果第109页
     ·制备色谱分离组分的几丁寡糖含量的测定结果第109-110页
     ·TLC层析结果第110页
     ·ESI-MS分析结果第110-113页
     ·NMR分析结果第113页
   ·本章小结第113-115页
第五章 重组去乙酰基水解酶(nodBprotein)的表达及其活性鉴定第115-133页
   ·引言第115页
   ·试验菌株第115页
   ·主要试验材料第115-116页
   ·主要实验仪器第116页
   ·培养基第116-117页
   ·试验方法第117-126页
     ·试验操作流程第117页
     ·根瘤菌的培养及基因组第117页
     ·重组nodB基因的克隆及表达载体的构建第117-122页
     ·重组大肠杆菌的诱导表达第122页
     ·目的蛋白的大量制备第122-123页
     ·包含体的处理第123页
     ·亲和层析纯化重组NodB蛋白第123-124页
     ·重组NodB蛋白贮存液的制备第124页
     ·NodB酶解体系第124页
     ·酶解寡糖产物的分离纯化第124-125页
     ·分析方法第125-126页
   ·结果与讨论第126-131页
     ·重组nodB基因表达载体的构建及转化结果第126页
     ·酶切鉴定结果第126-128页
     ·重组NodB蛋白的诱导表达结果第128-131页
   ·本章小结第131-133页
第六章 论文总结第133-138页
   ·取得的研究结果第133-136页
   ·结果讨论第136-138页
References第138-146页
在读期间论文及专利第146-147页
致谢第147-148页
学位论文评阅及答辩情况表第148-149页
附录第149-167页

 
 
论文编号BS1626773,这篇论文共167
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