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马乳酒样乳杆菌ZW3中乳糖酶基因LacLM在毕赤酵母中的克隆表达
 
     论文目录
 
摘要第4-5页
ABSTRACT第5页
1 前言第8-17页
    1.1 研究背景第8-11页
        1.1.1 不同来源的乳糖酶第8-9页
        1.1.2 乳糖酶水解乳糖作用机制第9-10页
        1.1.3 乳糖酶国内外的应用及研究进展第10-11页
    1.2 乳糖酶的表达系统第11-15页
        1.2.1 大肠杆菌表达系统第11-12页
        1.2.2 毕赤酵母表达系统第12-15页
    1.3 本文研究的意义与主要内容第15-17页
        1.3.1 选题的目的意义第15页
        1.3.2 研究的主要内容第15-17页
2 材料与方法第17-35页
    2.1 材料第17-24页
        2.1.1 实验中使用的菌种、质粒与引物第17页
        2.1.2 实验试剂第17-19页
        2.1.3 仪器与设备第19-20页
        2.1.4 抗生素第20页
        2.1.5 工具酶及DNA、蛋白Marker第20-21页
        2.1.6 培养基第21-22页
        2.1.7 实验有关溶液的配制第22-24页
    2.2 实验方法第24-35页
        2.2.1 生物信息学分析工具第24页
        2.2.2 β-半乳糖苷酶基因LacLM毕赤酵母载体的构建第24-26页
        2.2.3 转化大肠杆菌DH5α第26-27页
        2.2.4 Pichia pastoris GS115工程菌株的构建及验证第27-29页
        2.2.5 酵母工程菌的培养和β-半乳糖苷酶的诱导表达第29页
        2.2.6 β-半乳糖苷酶酶的SDS-PAGE分析第29-30页
        2.2.7 毕赤酵母超声破碎的条件第30-31页
        2.2.8 毕赤酵母重组子总RNA的提取第31页
        2.2.9 RNA逆转录为cDNA步骤第31-32页
        2.2.10 cDNA PCR反应验证第32页
        2.2.11 菌体密度的测定第32页
        2.2.12 Bradford法测定乳糖酶粗酶液蛋白质含量第32-33页
        2.2.13 乳糖酶重组菌中β-半乳糖苷酶活性测定第33-34页
        2.2.14 优化ZW3β-半乳糖苷酶在Pichia pastoris中的表达条件第34-35页
3 结果与讨论第35-61页
    3.1 β-半乳糖苷酶酶LacLM的生物信息学分析第35-45页
        3.1.1 LacLM基因核苷酸序列分析第35页
        3.1.2 LacLM氨基酸序列分析第35-37页
        3.1.3 蛋白保守功能区分析第37-38页
        3.1.4 β-半乳糖苷酶LacLM糖基化位点分析第38-39页
        3.1.5 β-半乳糖苷酶LacLM信号肽分析第39-40页
        3.1.6 β-半乳糖苷酶LacLM蛋白二级结构预测第40-41页
        3.1.7 β-半乳糖苷酶LacLM蛋白三级结构预测分析第41-43页
        3.1.8 β-半乳糖苷酶LacLM序列在毕赤酵母中稀有密码子的预测第43-45页
    3.2 PCR扩增马乳酒样乳杆菌乳糖酶基因第45-46页
    3.3 重组载体的构建及验证第46-49页
    3.4 P.pastoris工程菌株的构建及筛选第49-52页
        3.4.1 酵母转化子的PCR鉴定第49-51页
        3.4.2 多拷贝重组子的筛选第51-52页
    3.5 大亚基LacL与小亚基LacM分别在毕赤酵母中的表达第52-54页
    3.6 毕赤酵母重组子总RNA的提取与反转录第54-55页
    3.7 乳糖酶摇瓶发酵条件的优化第55-59页
        3.7.1 毕赤酵母重组子生长曲线的测定第55-56页
        3.7.2 发酵温度对乳糖酶表达水平的影响第56页
        3.7.3 甲醇添加量对乳糖酶表达水平的影响第56-57页
        3.7.4 发酵初始pH值对乳糖酶表达水平的影响第57页
        3.7.5 溶氧对乳糖酶表达水平的影响第57-59页
        3.7.6 最优发酵时间第59页
    3.8 讨论第59-61页
4 结论第61-62页
5 展望第62-63页
6 参考文献第63-71页
7 致谢第71-72页
附录第72-73页

 
 
论文编号BS2489674,这篇论文共73
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