| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 漆酶及其应用 | 第11-21页 |
| 1.1.1 漆酶的来源与分布 | 第11-12页 |
| 1.1.2 漆酶的化学组成 | 第12页 |
| 1.1.3 漆酶的分子结构 | 第12-14页 |
| 1.1.4 漆酶的催化反应机制 | 第14-16页 |
| 1.1.5 漆酶的底物和抑制剂 | 第16-17页 |
| 1.1.6 漆酶的催化特性 | 第17-18页 |
| 1.1.7 漆酶的功能 | 第18页 |
| 1.1.8 漆酶基因克隆及表达 | 第18-19页 |
| 1.1.9 漆酶的应用 | 第19-21页 |
| 1.2 嗜热细菌漆酶最新研究进展 | 第21页 |
| 1.3 生物漂白简介 | 第21-24页 |
| 1.3.1 细菌漆酶应用于纸浆生物漂白 | 第22-23页 |
| 1.3.2 木聚糖酶应用于纸浆生物漂白 | 第23页 |
| 1.3.3 生物漂白技术的现状和发展趋势 | 第23-24页 |
| 1.4 立题背景及主要研究内容 | 第24-27页 |
| 第二章 嗜热栖热菌胞内漆酶基因的定位改造及高效表达 | 第27-47页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-36页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27-28页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.5 T.thermophilus HB27 菌株基因组DNA的提取 | 第29页 |
| 2.1.6 电转化感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.1.7 基因操作及引物合成 | 第30页 |
| 2.1.8 目的基因的PCR扩增 | 第30页 |
| 2.1.9 重组质粒pHsh-TLa的构建 | 第30页 |
| 2.1.10 漆酶天然基因的选择性密码子优化 | 第30-34页 |
| 2.1.11 重组Tth-laccase的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.1.12 漆酶活性测定 | 第35页 |
| 2.1.13 SDS-PAGE分析 | 第35-36页 |
| 2.2 结果 | 第36-45页 |
| 2.2.1 漆酶基因克隆及重组质粒构建 | 第36页 |
| 2.2.2 漆酶基因的序列测定 | 第36-39页 |
| 2.2.3 漆酶天然基因在大肠杆菌宿主中的表达 | 第39页 |
| 2.2.4 漆酶成熟肽编码序列的选择性密码子优化 | 第39-45页 |
| 2.3 讨论 | 第45-46页 |
| 2.4 本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 耐热重组漆酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第47-55页 |
| 3.1 材料与方法 | 第47-50页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第47页 |
| 3.1.2 培养基 | 第47页 |
| 3.1.3 主要仪器及试剂 | 第47页 |
| 3.1.4 电转化感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| 3.1.5 重组Tth-laccase的制备与纯化 | 第48页 |
| 3.1.6 漆酶活性测定 | 第48页 |
| 3.1.7 蛋白质浓度测定 | 第48-49页 |
| 3.1.8 SDS-PAGE分析 | 第49页 |
| 3.1.9 重组Tth-laccase酶学性质分析 | 第49-50页 |
| 3.1.10 金属离子对酶活性的影响 | 第50页 |
| 3.2 结果 | 第50-54页 |
| 3.2.1 Cu2+ 对重组Tth-laccase热稳定性的影响 | 第50页 |
| 3.2.2 重组Tth-laccase的分离纯化 | 第50-52页 |
| 3.2.3 重组Tth-laccase的酶学性质 | 第52-54页 |
| 3.2.4 金属离子对重组Tth-laccase催化活性的影响 | 第54页 |
| 3.3 讨论 | 第54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 耐热重组漆酶的麦草浆漂白研究 | 第55-65页 |
| 4.1 材料与方法 | 第55-57页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第55-56页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第56页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第56页 |
| 4.1.4 培养基制备 | 第56页 |
| 4.1.5 电转化感受态细胞制作 | 第56页 |
| 4.1.6 重组Tth-laccase制备及酶活力测定 | 第56-57页 |
| 4.1.7 漆酶纸浆生物漂白的条件优化 | 第57页 |
| 4.1.8 纸浆无氯化学漂白 | 第57页 |
| 4.1.9 纸浆分析 | 第57页 |
| 4.2 结果 | 第57-62页 |
| 4.2.1 漆酶用量对纸浆漂白效果的影响 | 第57-58页 |
| 4.2.2 酶处理条件优化 | 第58-59页 |
| 4.2.3 漆酶处理对化学漂白的促漂效果 | 第59-60页 |
| 4.2.4 漆酶处理对过氧化氢消耗量的节省效果 | 第60-61页 |
| 4.2.5 漆酶处理对纸浆物理性质的影响 | 第61-62页 |
| 4.2.6 漆酶-介体体系漂白麦草浆 | 第62页 |
| 4.3 讨论 | 第62-64页 |
| 4.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第五章 耐热重组木聚糖酶/耐热重组漆酶协同漂白麦草浆 | 第65-74页 |
| 5.1 材料与方法 | 第65-67页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第65页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第65-66页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第66页 |
| 5.1.4 培养基制备 | 第66页 |
| 5.1.5 感受态细胞制备和电转化操作 | 第66页 |
| 5.1.6 重组木聚糖酶/漆酶的大肠杆菌表达系统构建 | 第66页 |
| 5.1.7 重组Tth-laccase和重组XynB的制备 | 第66-67页 |
| 5.1.8 纸浆酶处理 | 第67页 |
| 5.1.9 过氧化氢漂白 | 第67页 |
| 5.1.10 纸浆分析 | 第67页 |
| 5.2 结果 | 第67-71页 |
| 5.2.1 重组木聚糖酶XynB纸浆处理条件优化 | 第67-69页 |
| 5.2.2 双酶漂白次序的确定 | 第69-70页 |
| 5.2.3 双酶协同处理对麦草浆过氧化氢漂白的促进作用 | 第70-71页 |
| 5.3 讨论 | 第71-72页 |
| 5.4 本章小结 | 第72-74页 |
| 主要结论 | 第74-76页 |
| 论文创新点 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第88页 |
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