| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词一览表 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-30页 |
| 1 | 第12-21页 |
| 1.1 猪轮状病毒病概述 | 第12页 |
| 1.2 病原 | 第12-15页 |
| 1.2.1 轮状病毒粒子的分类和形态 | 第12-13页 |
| 1.2.2 轮状病毒分子基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.2.3 病毒蛋白结构 | 第14-15页 |
| 1.3 轮状病毒的分型 | 第15-16页 |
| 1.3.1 电泳分型 | 第15-16页 |
| 1.3.2 血清型分型 | 第16页 |
| 1.4 轮状培养特性 | 第16-17页 |
| 1.5 猪轮状病毒流行病学研究 | 第17-18页 |
| 1.6 猪轮状病毒临床症状 | 第18-19页 |
| 1.7 轮状病毒诊断方法 | 第19-21页 |
| 1.7.1 电镜法(Electron Microscopy) | 第19页 |
| 1.7.2 病毒分离鉴定 | 第19页 |
| 1.7.3 血清学诊断方法 | 第19-20页 |
| 1.7.4 基因检测技术 | 第20页 |
| 1.7.5 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术 | 第20-21页 |
| 2 猪星状病毒病 | 第21-28页 |
| 2.1 猪星状病概述 | 第21页 |
| 2.2 病原 | 第21-23页 |
| 2.2.1 星状病毒分类及形态 | 第21-22页 |
| 2.2.2 星病毒分子基因组结构 | 第22-23页 |
| 2.2.3 病毒蛋白结构 | 第23页 |
| 2.3 星状病毒病毒的分型 | 第23-24页 |
| 2.4 星状病毒的培养 | 第24-25页 |
| 2.5 星状病毒流行病学研究 | 第25-26页 |
| 2.6 猪星状病毒的临床症状 | 第26页 |
| 2.7 猪星状病毒检测技术研究进展 | 第26-28页 |
| 2.7.1 电镜法(Electron Microscopy) | 第27页 |
| 2.7.2 细胞分离培养 | 第27页 |
| 2.7.3 血清学诊断技术 | 第27-28页 |
| 2.7.4 基因检测技术 | 第28页 |
| 5 本研究的目的意义及主要内容 | 第28-30页 |
| 第二章 猪A群轮状病毒、猪C群轮状病毒和猪星状病毒多重RT-PCR检测方法的建立 | 第30-59页 |
| 1 材料与方法 | 第30-39页 |
| 1.1 病毒株、菌株、病料 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 1.3 主要仪器 | 第30-31页 |
| 1.4 引物设计和合成 | 第31-32页 |
| 1.5 病料处理 | 第32页 |
| 1.6 病毒增殖 | 第32页 |
| 1.7 病毒核酸的提取[112,113] | 第32-33页 |
| 1.8 反转录合成cDNA | 第33页 |
| 1.9 单项检测GARV、GCRV和PAstVRT-PCR方法的建立 | 第33-35页 |
| 1.9.1 单项RT-PCR扩增 | 第33-34页 |
| 1.9.2 单项RT-PCR产物克隆和序列测定 | 第34页 |
| 1.9.3 单项GARV、GCRV和PAstVRT-PCR的优化 | 第34页 |
| 1.9.4 单项GARV、GCRV和PAstVRT-PCR的特异性检验 | 第34页 |
| 1.9.5 单项GARV、GCRV和PAstVRT-PCR的敏感性检验 | 第34-35页 |
| 1.9.6 单项GARV、GCRV和PAstVRT-PCR的重复性试验 | 第35页 |
| 1.10 GARV、GCRV和PAstV多重RT-PCR检测方法的建立 | 第35-38页 |
| 1.10.1 多重RT-PCR反应缓冲液的优化 | 第35页 |
| 1.10.2 多重RT-PCR反应酶浓度的优化 | 第35-36页 |
| 1.10.3 多重RT-PCR反应Mg~(2+)浓度的优化 | 第36页 |
| 1.10.4 多重RT-PCR反应DNTP浓度的优化 | 第36-37页 |
| 1.10.5 多重RT-PCR退火温度的优化 | 第37页 |
| 1.10.6 多重RT-PCR延伸时间的优化 | 第37页 |
| 1.10.7 多重RT-PCR引物浓度优化 | 第37-38页 |
| 1.10.8 多重RT-PCR方法敏感性试验 | 第38页 |
| 1.10.9 多重RT-PCR方法的特异性试验 | 第38页 |
| 1.10.10 多重RT-PCR方法的重复性试验 | 第38页 |
| 1.11 多重RT-PCR产物测序及序列比对分析 | 第38页 |
| 1.12 多重RT-PCR方法的临床应用及与单项RT-PCR效果比较 | 第38-39页 |
| 2 结果 | 第39-55页 |
| 2.1 单项RT-PCR检测方法的建立 | 第39-46页 |
| 2.1.1 单项RT-PCR扩增 | 第39页 |
| 2.1.2 单项RT-PCR阳性样品目的片段的克隆测序与序列分析 | 第39-40页 |
| 2.1.3 单项RT-PCR扩增最佳退火温度的确定 | 第40-42页 |
| 2.1.4 单项RT-PCR特异性检测结果 | 第42-43页 |
| 2.1.5 单项RT-PCR敏感性检测结果 | 第43-45页 |
| 2.1.6 单项RT-PCR重复性检测结果 | 第45-46页 |
| 2.2 多重RT-PCR应条件优化结果 | 第46-51页 |
| 2.2.1 多重RT-PCR反应缓冲液的选择的结果 | 第46-47页 |
| 2.2.2 多重RT-PCR反应酶浓度的优化的结果 | 第47-48页 |
| 2.2.3 多重RT-PCR反应Mg~(2+)浓度的优化的结果 | 第48页 |
| 2.2.4 多重RT-PCR反应dNTP浓度的优化的结果 | 第48-49页 |
| 2.2.5 多重RT-PCR退火温度的优化的结果 | 第49-50页 |
| 2.2.6 多重RT-PCR延伸时间的优化的结果 | 第50-51页 |
| 2.2.7 多重RT-PCR引物浓度优化的结果 | 第51页 |
| 2.3 多重RT-PCR的敏感性试验 | 第51-52页 |
| 2.4 多重RT-PCR的特异性试验 | 第52-53页 |
| 2.5 多重RT-PCR的重复性试验 | 第53-54页 |
| 2.6 多重RT-PCR产物测序及序列比对分析 | 第54页 |
| 2.7 多重RT-PCR临床检测及与单项RT-PCR效果比较 | 第54-55页 |
| 3 分析讨论 | 第55-58页 |
| 3.1 多重RT-PCR方法 | 第55页 |
| 3.2 靶基因的选择 | 第55-56页 |
| 3.3 引物设计 | 第56页 |
| 3.4 反应条件的优化 | 第56-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 第三章 猪A群轮状病毒、猪C群轮状病毒和猪星状病毒多重RT-PCR检测方法的临床应用及分子流行病学调查 | 第59-82页 |
| 1 实验材料 | 第59页 |
| 1.1 病料 | 第59页 |
| 1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 1.3 主要仪器 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-60页 |
| 2.1 病料处理 | 第59-60页 |
| 2.2 病毒核酸的提取 | 第60页 |
| 2.3 反转录合成cDNA | 第60页 |
| 2.4 GARV、GCRV和AstV多重RT-PCR检测 | 第60页 |
| 2.5 目的基因的克隆和鉴定 | 第60页 |
| 2.6 序列测定与分析 | 第60页 |
| 3. 结果 | 第60-76页 |
| 3.1 临床样品中GARV、GCRV和PAstV感染情况 | 第60-71页 |
| 3.1.1 不同地区感染情况调查 | 第61-62页 |
| 3.1.2 混合感染类型的调查 | 第62-63页 |
| 3.1.3 不同季节感染调查 | 第63-68页 |
| 3.1.4 仔猪不同日龄感染调查 | 第68-71页 |
| 3.2 同源性分析 | 第71-76页 |
| 3.2.1 GARV同源性和进化分析 | 第71-72页 |
| 3.2.2 GCRV同源性和进化分析 | 第72-73页 |
| 3.2.3 PAstV同源性和进化分析 | 第73-76页 |
| 4 讨论 | 第76-81页 |
| 4.1 地区分布 | 第76-78页 |
| 4.2 混合感染 | 第78页 |
| 4.3 季节分布 | 第78-79页 |
| 4.5 仔猪日龄 | 第79页 |
| 4.6 GARV、GCRV和PastV核苷酸同源性及序列分析 | 第79-81页 |
| 5 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第90-91页 |
| 附录 | 第91-100页 |
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