致谢 | 第4-8页 |
英文缩写词表 | 第8-9页 |
摘要 | 第9-11页 |
文献综述 | 第11-24页 |
1 禽腺病毒生物学特点 | 第11-14页 |
1.1 禽腺病毒的形态特征及理化性质 | 第11-12页 |
1.2 禽腺病毒主要蛋白及功能 | 第12-14页 |
2 禽腺病毒血清4型的流行病学研究 | 第14-15页 |
3 禽腺病毒的检测方法 | 第15-20页 |
3.1 病原的分离鉴定 | 第15页 |
3.2 血清学检测方法 | 第15-17页 |
3.3 分子生物学检测方法 | 第17-20页 |
4 重组酶聚合酶扩增技术 | 第20-23页 |
5 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
试验研究 | 第24-58页 |
试验一:禽腺病毒血清4型RPA-LFD快速检测方法的建立 | 第24-31页 |
1 材料与方法 | 第24-27页 |
1.1 材料 | 第24-25页 |
1.2 DNA的提取 | 第25页 |
1.3 RPA引物设计 | 第25页 |
1.4 FAd V-4 hexon基因标准质粒的构建 | 第25-26页 |
1.5 RPA-LFD反应体系及反应条件的确定 | 第26-27页 |
1.6 试验结果的判定标准 | 第27页 |
1.7 特异性评价 | 第27页 |
1.8 敏感性评价 | 第27页 |
1.9 RPA-LFD方法检测FAd V-4 的应用 | 第27页 |
2 结果 | 第27-30页 |
2.1 RPA反应体系及反应条件的优化 | 第27-29页 |
2.2 特异性评价 | 第29页 |
2.3 敏感性评价 | 第29-30页 |
2.4 临床样品的检测 | 第30页 |
3 小结与讨论 | 第30-31页 |
试验二:基于FAd V-4 中国流行株Fiber2蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立 | 第31-42页 |
1 材料与方法 | 第31-35页 |
1.1 材料 | 第31-32页 |
1.2 p ET32a-fiber2-knob表达载体的构建 | 第32-33页 |
1.3 重组蛋白knob的表达纯化与免疫原性分析 | 第33-34页 |
1.4 重组knob蛋白间接ELISA方法的建立 | 第34页 |
1.5 特异性试验 | 第34页 |
1.6 敏感性试验 | 第34-35页 |
1.7 重复性试验 | 第35页 |
1.8 符合率试验 | 第35页 |
1.9 临床血清样品检测 | 第35页 |
2 结果 | 第35-40页 |
2.1 重组质粒p ET32a-fiber2-knob的构建 | 第35-36页 |
2.2 重组蛋白的表达纯化western blotting分析 | 第36页 |
2.3 间接ELISA最佳反应条件的确定 | 第36-38页 |
2.4 间接ELISA方法判定标准的确定 | 第38页 |
2.5 特异性试验 | 第38页 |
2.6 敏感性试验 | 第38页 |
2.7 重复性试验 | 第38-39页 |
2.8 准确性试验 | 第39页 |
2.9 临床血清样品检测 | 第39-40页 |
3 小结与讨论 | 第40-42页 |
试验三:抗禽腺病毒hexon469-775aa单克隆抗体的制备与鉴定 | 第42-52页 |
1 材料与方法 | 第42-47页 |
1.1 材料 | 第42页 |
1.2 抗原的制备 | 第42-45页 |
1.3 动物免疫 | 第45页 |
1.4 检测FAd V-4 抗体的间接ELISA方法的建立 | 第45页 |
1.5 细胞融合与单克隆抗体筛选 | 第45-47页 |
1.6 单克隆抗体的鉴定 | 第47页 |
1.7 中和活性检测 | 第47页 |
2 结果 | 第47-51页 |
2.1 重组p ET32a-hexon469-775aa质粒的鉴定 | 第47-48页 |
2.2 重组Hexon469-775aa蛋白的表达、纯化与反应原性分析 | 第48-49页 |
2.3 抗体检测ELISA方法的最佳条件 | 第49页 |
2.4 杂交瘤细胞株的获得 | 第49-50页 |
2.5 单抗亚类的鉴定 | 第50页 |
2.6 单抗反应原性分析 | 第50页 |
2.7 单抗特异性的鉴定 | 第50-51页 |
2.8 单克隆抗体中和活性的鉴定 | 第51页 |
3 小结与讨论 | 第51-52页 |
试验四.禽腺病毒双抗体夹心ELISA检测抗原的方法建立 | 第52-58页 |
1 材料与方法 | 第52-54页 |
1.1 材料 | 第52页 |
1.2 双抗体夹心ELISA方法的基本步骤 | 第52-53页 |
1.3 禽腺病毒双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第53-54页 |
1.4 特异性试验 | 第54页 |
1.5 敏感性试验 | 第54页 |
1.6 重复性试验 | 第54页 |
1.7 符合率试验 | 第54页 |
2 结果 | 第54-56页 |
2.1 双抗体夹心ELISA最佳反应条件的确定 | 第54-55页 |
2.2 双抗体夹心ELISA判定标准的确定 | 第55页 |
2.3 特异性试验 | 第55页 |
2.4 敏感性试验 | 第55-56页 |
2.5 重复性试验 | 第56页 |
2.6 符合率试验 | 第56页 |
3 小结与讨论 | 第56-58页 |
全文总结 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-68页 |
ABSTRACT | 第68-70页 |
附作者读研期间发表文章 | 第71页 |