中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
第一章 引言 | 第9-15页 |
一、 固氮酶生物化学,分子生物学及结构生物学研究 | 第9-13页 |
1 固氮酶的基本组成结构与基因编码 | 第9-10页 |
2 固氮酶MoFe蛋白及其与Fe蛋白的固氮酶复合物晶体的结构 | 第10-12页 |
3 突变种固氮酶的结构与功能研究 | 第12-13页 |
二、 固氮酶生物多样性研究 | 第13-15页 |
第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
一、 试剂配制 | 第15-17页 |
1 修改的Burk's培养基 | 第15页 |
2 奈氏试剂 | 第15页 |
3 除氧溶液 | 第15页 |
4 Tris-HCl缓冲液及不同离子强度的厌氧Tris-HCl缓冲液 | 第15-16页 |
5 测蛋白浓度所用的试剂 | 第16页 |
6 ATP发生系统 | 第16页 |
7 蛋白质晶体生长所需的试剂 | 第16-17页 |
二、 实验材料及样品制备 | 第17-20页 |
1 棕色固氮菌及其突变种的培养 | 第17页 |
2 酶的分离纯化 | 第17-20页 |
2.1 突变种UW_(45)固氮酶nifB~- MoFe蛋白和nifB~- Fe蛋白的分离纯化 | 第17-19页 |
2.2 突变种DJ_(54)固氮酶△nifH MoFe 蛋白的分离纯化 | 第19-20页 |
三、 实验方法 | 第20-23页 |
1 蛋白质浓度测定 | 第20-21页 |
2 固氮酶及与异源固氮酶两组分互补的C_2H_2及H~+还原活性的测定 | 第21页 |
3 电泳分析 | 第21页 |
4 蛋白质结晶方法 | 第21-23页 |
第三章 试验结果与讨论 | 第23-45页 |
1 突变种nifB~- MoFe蛋白蛋白的分离纯化、特性鉴定与结晶研究 | 第23-31页 |
1.1 棕色固氮菌突变种UW_(45)培养 | 第23-24页 |
1.2 突变种nifB~- MoFe蛋白MoFe蛋白的分离纯化 | 第24页 |
1.3 nifo~- MoFe蛋白的特性鉴定 | 第24-26页 |
1.4 nifB~- MoFe蛋白结晶研究 | 第26-31页 |
1.4.1 Hepes缓冲液的浓度 | 第27页 |
1.4.2 PEG 8000的浓度 | 第27-29页 |
1.4.3 MgCl_2和NaCl的浓度 | 第29-30页 |
1.4.4 结晶方法及其实验操作的影响 | 第30-31页 |
2 突变种△nifH MoFe蛋白和△nifE MoFe蛋白的分离纯化与结晶研究 | 第31-34页 |
2.1 △nifH MoFe蛋白的分离纯化和特性鉴定 | 第31-32页 |
2.2 △nifH MoFe蛋白的初步结晶研究 | 第32-33页 |
2.3 △nifE MoFe蛋白的初步结晶研究 | 第33-34页 |
3 新型固氮酶MnFe蛋白和CrFe蛋白的研究 | 第34-45页 |
3.1 新型固氮酶MnFe蛋白和CrFe蛋白特性研究进展 | 第34-37页 |
3.1.1 MnFe蛋白和CrFe蛋白的亚基组成 | 第34-35页 |
3.1.2 MnFe蛋白和CrFe蛋白的底物还原活性 | 第35-37页 |
3.2 新型固氮酶MnFe蛋白和CrFe蛋白的晶体生长进展 | 第37-45页 |
3.2.1 结晶溶液系统的选择 | 第37-38页 |
3.2.2 PEG 8000、MgCl_2和NaCl最适浓度组成的筛选 | 第38-42页 |
(i) PEG 8000 | 第38-40页 |
(ii) MgCl_2 | 第40-42页 |
(iii) NaCl | 第42页 |
3.2.3 最适的结晶方法 | 第42-45页 |
第四章 结论 | 第45-46页 |
参考文献 | 第46-52页 |
缩略语表 | 第52-53页 |
攻读硕士学位期间已发表的的研究论文 | 第53-54页 |
致谢 | 第54-55页 |