| 目录 | 第1-12页 |
| 致谢 | 第12-13页 |
| 术语和缩略语表 | 第13-15页 |
| 中文摘要 | 第15-16页 |
| ABSTRACT | 第16-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-43页 |
| 1 农药残留生物快速测定方法概述 | 第18-32页 |
| ·活体生物测定方法 | 第18-19页 |
| ·用家蝇检测蔬菜中的残留农药 | 第18页 |
| ·用大型水蚤为试验材料监测蔬菜中农药的残留 | 第18-19页 |
| ·用发光细菌检测农药残留 | 第19页 |
| ·酶抑制测定方法 | 第19-21页 |
| ·胆碱酯酶抑制法 | 第19-20页 |
| ·植物酯酶抑制法 | 第20页 |
| ·有机磷水解酶法 | 第20-21页 |
| ·免疫测定方法 | 第21-32页 |
| ·半抗原的设计与合成 | 第21-23页 |
| ·人工抗原的制备 | 第23-24页 |
| ·抗体的制备 | 第24-26页 |
| ·免疫分析方法 | 第26-29页 |
| ·农药残留免疫检测新技术 | 第29-30页 |
| ·不同标记免疫方法的优缺点 | 第30-31页 |
| ·免疫分析方法及其试剂盒的质量控制 | 第31-32页 |
| 2 免疫测定技术在农药残留检测中的应用现状 | 第32-37页 |
| 3 三唑磷、克百威ELISA试剂盒研究现状 | 第37-39页 |
| 4 立题依据 | 第39-43页 |
| ·开展ELISA产业化技术研究,是我国经济与社会发展的迫切需要 | 第39-41页 |
| ·当前,我国食品卫生安全形势十分严峻 | 第39-40页 |
| ·是加强我国农药残留监控与管理、完善农药残留检测(监测)体系的需要 | 第40-41页 |
| ·本课题得到了有关单位和基金的资助 | 第41-42页 |
| ·本课题得到了国家自然科学基金的资助 | 第41-42页 |
| ·本课题得到了农业部农药检定所的资助 | 第42页 |
| ·本课题得到了浙江来益生物技术有限公司的资助 | 第42页 |
| ·开展农药ELISA研究,本研究所具有扎实的研究基础 | 第42页 |
| ·三唑磷、克百威农药在农业生产中的应用现状 | 第42-43页 |
| 第二章 三唑磷、克百威ELISA试剂盒研制 | 第43-114页 |
| 1 材料与方法 | 第43-58页 |
| ·实验材料 | 第43-46页 |
| ·试剂与药品 | 第43-44页 |
| ·缓冲液 | 第44-45页 |
| ·仪器与材料 | 第45-46页 |
| ·实验动物 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-58页 |
| ·半抗原的设计与合成 | 第46-49页 |
| ·半抗原-蛋白质偶联物的制备及鉴定 | 第49-50页 |
| ·酶标记抗体的制备 | 第50页 |
| ·抗三唑磷、抗克百威单克隆抗体的制备 | 第50-53页 |
| ·ELISA条件优化和方法的建立 | 第53-57页 |
| ·ELISA定性、定量方法的确定 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-110页 |
| ·半抗原分子设计与结构鉴定 | 第58-61页 |
| ·半抗原分子设计 | 第58-60页 |
| ·三唑磷半抗原结构鉴定 | 第60-61页 |
| ·克百威半抗原结构鉴定 | 第61页 |
| ·人工抗原的鉴定与结合比测定 | 第61-62页 |
| ·三唑磷人工抗原的鉴定与结合比测定 | 第61-62页 |
| ·克百威人工抗原的鉴定与结合比测定 | 第62页 |
| ·腹水效价测定 | 第62页 |
| ·ELISA条件优化 | 第62-73页 |
| ·酶标板的选择 | 第62-63页 |
| ·包被缓冲液的选择 | 第63-64页 |
| ·包被温度和时间的选择 | 第64页 |
| ·洗涤次数对吸附的影响 | 第64页 |
| ·不同封闭物对非特异性吸附的影响 | 第64-65页 |
| ·抗体(抗原)/酶标记物工作浓度优化 | 第65页 |
| ·不同溶剂对ELISA竞争结合反应的影响 | 第65-66页 |
| ·酶的选择 | 第66页 |
| ·点板时间对OD值影响试验 | 第66-67页 |
| ·抗体亲和性和检测灵敏度 | 第67-69页 |
| ·抗体的特异性 | 第69-70页 |
| ·方法的准确性试验 | 第70-71页 |
| ·稳定剂对抗体活性及保存期的影响 | 第71-72页 |
| ·冻融试验 | 第72-73页 |
| ·样品基质影响试验 | 第73-77页 |
| ·不同样品基质对三唑磷ELISA方法的影响 | 第73-75页 |
| ·不同样品基质对克百威ELISA方法的影响 | 第75-77页 |
| ·添加回收率试验 | 第77-100页 |
| ·样品中三唑磷添加回收率试验 | 第77-87页 |
| ·样品中克百威添加回收率试验 | 第87-100页 |
| ·样品各浓度处理组板内、板间ELISA测定值精密度统 | 第100-103页 |
| ·三唑磷不同处理组板内、相同处理组板间ELISA测定值精密度统计 | 第100-101页 |
| ·克百威不同处理组板内、相同处理组板间ELISA测定值精密度统计 | 第101-103页 |
| ·处理组板内、板间ELISA测定值显著性检验 | 第103-109页 |
| ·三唑磷不同添加浓度组间、相同添加浓度组板间ELISA测定值显著性检验 | 第103-106页 |
| ·克百威不同添加浓度组间、相同添加浓度组板间ELISA测定值显著性检验 | 第106-109页 |
| ·样品本底值及实际最低检测限设定 | 第109-110页 |
| 3 定性、定量判定方法 | 第110页 |
| 4 试剂盒构建 | 第110-111页 |
| 5 试剂盒比对与验证 | 第111-114页 |
| ·与仪器比对 | 第111-113页 |
| ·三唑磷ELISA试剂盒与仪器比对 | 第111-112页 |
| ·克百威ELISA试剂盒与仪器比对 | 第112-113页 |
| ·不同实验室比对试验 | 第113-114页 |
| 第三章 ELISA试剂盒的产业化 | 第114-128页 |
| 1 ELISA试剂盒产业化生产的技术规程和技术要点 | 第114-124页 |
| ·三唑磷、克百威半抗原中试合成工艺 | 第114-116页 |
| ·克百威半抗原中试合成工艺 | 第114-115页 |
| ·三唑磷半抗原中试合成工艺 | 第115-116页 |
| ·半抗原-蛋白质偶联物制备工艺 | 第116页 |
| ·半抗原-BSA偶联物 | 第116页 |
| ·半抗原-OVA偶联物 | 第116页 |
| ·半抗原-HRP偶联物 | 第116页 |
| ·主要控制指标 | 第116页 |
| ·单克隆抗体的生产制备工艺 | 第116-121页 |
| ·动物的选择 | 第116页 |
| ·骨髓瘤细胞的选择 | 第116-117页 |
| ·小鼠免疫 | 第117页 |
| ·细胞融合 | 第117-119页 |
| ·单克隆抗体的克隆——有限稀释法 | 第119页 |
| ·腹水制备与细胞冻存 | 第119页 |
| ·细胞复苏 | 第119-120页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第120页 |
| ·单克隆抗体的纯化(辛酸-硫酸铵法) | 第120页 |
| ·无菌操作技术要点 | 第120-121页 |
| ·实验器具的清洗与消毒 | 第121页 |
| ·酶和底物的选择 | 第121-123页 |
| ·ELISA操作方法的标准化 | 第123-124页 |
| ·加样 | 第123页 |
| ·温育 | 第123页 |
| ·洗涤 | 第123-124页 |
| ·比色 | 第124页 |
| 2 试剂盒生产企业标准(拟) | 第124页 |
| 3 ELISA试剂盒生产(设备)投资概算 | 第124-125页 |
| ·ELISA试剂盒生产成本核算 | 第124页 |
| ·ELISA试剂盒生产(设备)投资概算 | 第124-125页 |
| 4 试剂盒生产的"三废"排放情况 | 第125-126页 |
| 5 试剂盒生产工艺流程 | 第126页 |
| 6 市场分析预测 | 第126-128页 |
| ·市场容量分析 | 第126页 |
| ·速测试剂盒的主要用途及用户分析 | 第126页 |
| ·风险预测 | 第126-128页 |
| ·政策风险 | 第126-127页 |
| ·技术风险 | 第127页 |
| ·市场风险 | 第127页 |
| ·行业产品竞争风险 | 第127-128页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第128-134页 |
| 1 取得的成果 | 第128页 |
| 2 不足与展望 | 第128-129页 |
| 3 讨论 | 第129-134页 |
| ·分子模拟方法在农药半抗原合理化设计中是一种重要的探索思路 | 第130-131页 |
| ·统计检验分析是农药ELISA试剂盒产业化开发的重要环节 | 第131-132页 |
| ·保存期是试剂盒产业化开发的重要条件 | 第132-134页 |
| 参考文献 | 第134-145页 |
| 在校期间发表的文章 | 第145-146页 |
| 在校期间申请的国家发明专利 | 第146-147页 |
| 附件 | 第147-198页 |
| 附件1 三唑磷ELISA试剂盒使用说明书 | 第147-158页 |
| 附件2 克百威ELISA试剂盒使用说明书 | 第158-169页 |
| 附件3 国家农药检定所试剂盒应用证明 | 第169-174页 |
| 附件4 农业部环境质量监督检验测试中心(天津)试剂盒应用证明 | 第174-177页 |
| 附件5 农业部农药质量监督检验测试中心(上海)试剂盒应用证明 | 第177-182页 |
| 附件6 浙江省农药检定管理所试剂盒应用证明 | 第182-186页 |
| 附件7 浙江省出入境检验检疫局试剂盒应用证明 | 第186-190页 |
| 附件8 三唑磷、克百威ELISA试剂盒生产标准 | 第190-198页 |
| 附件9 三唑磷、克百威ELISA试剂盒产品宣传单 | 第198页 |
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