摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
缩略词表 | 第10-11页 |
文献综述 | 第11-19页 |
1 NOD样受体蛋白 3 | 第11-14页 |
1.1 NLRP3的激活途径及调控 | 第12-13页 |
1.2 病毒感染对NLRP3的调控 | 第13-14页 |
2 黑色素瘤分化相关基因 5 | 第14-18页 |
2.1 MDA5识别信号通路 | 第16-17页 |
2.2 病毒干扰MDA5逃逸免疫的机制 | 第17-18页 |
3 研究目的及意义 | 第18-19页 |
引言 | 第19-20页 |
1 材料与方法 | 第20-41页 |
1.1 材料 | 第20-25页 |
1.1.1 实验动物 | 第20页 |
1.1.2 质粒和菌株 | 第20页 |
1.1.3 相关试剂及试剂盒 | 第20页 |
1.1.4 主要溶液配制 | 第20-25页 |
1.1.5 主要实验仪器 | 第25页 |
1.2 方法 | 第25-31页 |
1.2.1 鸡肝脏组织Total RNA提取 | 第25-26页 |
1.2.2 合成cDNA第一链 | 第26-27页 |
1.2.3 目的片段的获得 | 第27-31页 |
1.3 NLRP3和MDA5多肽抗原的表达、纯化和抗体制备 | 第31-37页 |
1.3.1 多肽抗原的预测 | 第31页 |
1.3.2 多肽抗原目的片段的获得 | 第31-34页 |
1.3.3 重组质粒的表达及条件优化 | 第34-35页 |
1.3.4 原核蛋白表达形式的鉴定 | 第35页 |
1.3.5 蛋白的大量提取与纯化 | 第35-36页 |
1.3.6 超微量核酸蛋白仪测定蛋白浓度 | 第36页 |
1.3.7 动物免疫 | 第36页 |
1.3.8 抗体的纯化 | 第36页 |
1.3.9 间接ELISA方法测定血清效价 | 第36页 |
1.3.10 Western-Blot | 第36-37页 |
1.4 真核表达重组质粒的构建 | 第37-41页 |
1.4.1 目的片段的获得 | 第37-38页 |
1.4.2 真核质粒的提取 | 第38-39页 |
1.4.3 DF-1 细胞的复苏、传代及细胞转染 | 第39页 |
1.4.4 细胞Western blot | 第39-41页 |
2 结果与分析 | 第41-55页 |
2.1 chNLRP3基因克隆、鉴定与重组质粒的构建结果 | 第41页 |
2.2 chMDA5基因的克隆、鉴定与重组质粒的构建结果 | 第41-42页 |
2.3 chNLRP3及chMDA5受体同源性分析结果 | 第42-45页 |
2.4 chNLRP3及chMDA5受体基因的抗原肽的获得 | 第45-47页 |
2.5 融合蛋白的诱导表达及条件优化 | 第47-50页 |
2.5.1 原核蛋白表达条件的优化 | 第47-49页 |
2.5.2 融合蛋白表达形式的鉴定结果 | 第49-50页 |
2.6 兔抗chNLRP3及chMDA5免疫血清的制备及其检测 | 第50-52页 |
2.7 chNLRP3和chMDA5在鸡DF-1 细胞内过表达与检测结果 | 第52-55页 |
3 讨论 | 第55-57页 |
3.1 NLRP3在免疫应答中发挥的作用 | 第55页 |
3.2 MDA5蛋白参与免疫应答 | 第55-57页 |
4 结论 | 第57-58页 |
参考文献 | 第58-64页 |
致谢 | 第64-65页 |
作者简介 | 第65页 |