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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--布氏白僵菌遗传转化体系的建立及稳定高效表达Pr1蛋白酶工程菌株的构建
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布氏白僵菌遗传转化体系的建立及稳定高效表达Pr1蛋白酶工程菌株的构建
 
     论文目录
 
目录第4-6页
摘要第6-8页
ABSTRACT第8-9页
符号说明第10-11页
第一章 绪论第11-20页
    1.1 白僵菌简介第12页
    1.2 白僵菌的致病机理第12-13页
    1.3 PRI蛋白酶第13-15页
    1.4 根瘤农杆菌(AGROBACTERIUM TUMEFACIENS)介导的真菌转化体系第15-17页
        1.4.1 遗传转化筛选标记第15页
        1.4.2 根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的真菌转化体系第15-16页
        1.4.3 元转化体系第16-17页
    1.5 真菌杀虫剂的安全性问题第17页
    1.6 昆虫病原真菌基因工程研究进展第17-18页
    1.7 实验室前期工作第18页
    1.8 本文的研究内容及意义第18-20页
第二章 材料与方法第20-29页
    2.1 材料第20-22页
        2.1.1 菌种与质粒第20页
        2.1.2 培养基第20-21页
        2.1.3 主要试剂及溶液第21-22页
    2.2 方法第22-29页
        2.2.1 菌体的培养条件第22页
        2.2.2 引物设计第22页
        2.2.3 PCR反应第22-23页
        2.2.4 琼脂糖凝胶电泳第23页
        2.2.5 限制性核酸内切酶酶切第23页
        2.2.6 连接反应第23页
        2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第23页
        2.2.8 大肠杆菌中质粒的提取第23-24页
        2.2.9 DNA序列测定第24页
        2.2.10 布氏白僵菌Pr1蛋白酶的诱导及活性测定第24-25页
        2.2.11 布氏白僵菌Pr1蛋白酶的诱导及活性测定第25页
        2.2.12 布氏白僵菌DNA的提取第25页
        2.2.13 布氏白僵菌孢子培养及处理第25页
        2.2.14 根癌农杆菌感受态细胞的制备和转化第25-26页
        2.2.15 根癌农杆菌中质粒的提取第26页
        2.2.16 大肠杆菌破碎及包涵体处理第26-27页
        2.2.17 利用镍柱法分离提纯His-tag标记酶第27页
        2.2.18 蛋白复性第27页
        2.2.19 蛋白质电泳技术第27-28页
        2.2.20 根瘤农杆菌介导的布氏白僵菌转化第28-29页
            2.2.20.1 布氏白僵菌孢子培养及处理。第28页
            2.2.20.2 根瘤农杆菌的培养及处理第28页
            2.2.20.3 根瘤农杆菌介导布氏白僵菌转化第28-29页
第三章 结果与讨论第29-56页
    3.1 布氏白僵菌PR1蛋白酶在大肠杆菌中的表达第29-34页
        3.1.1 构建质粒pBV220-Pr1cDNA ORF(6XHis)第29页
        3.1.2 重组子的筛选和酶切鉴定第29-31页
        3.1.3 Pr1蛋白酶基因在大肠杆菌中的表达第31-32页
        3.1.4 重组Pr1蛋白酶包涵体纯化第32页
        3.1.5 重组Pr1蛋白酶的纯化第32页
        3.1.6 变性Pr1蛋白酶的重折叠复性第32-33页
        3.1.7 复性Pr1蛋白酶的酶活测定第33页
        3.1.8 小结第33-34页
    3.2 根瘤农杆菌介导布氏白僵菌遗传转化体系的建立第34-46页
        3.2.1 布氏白僵菌遗传转化筛选标记的确定第34页
        3.2.2 丝状真菌组成型元件表达骨架的构建第34-39页
            3.2.2.1 质粒pUC19-TtrpC的构建第35-36页
            3.2.2.2 质粒pBPT19的构建第36-39页
        3.2.3 草丁磷除草剂抗性基因丝状真菌表达元件的构建第39-41页
        3.2.4 含组成型bar基因表达元件的根瘤农杆菌Ti质粒的构建第41-42页
        3.2.5 重组质粒pROKⅡ-bar导入根瘤农杆菌LBA4404第42-44页
        3.2.6 根瘤农杆菌介导布氏白僵菌遗传转化体系的建立第44-46页
        3.2.7 小结第46页
    3.3 构建布氏白僵菌类枯草杆菌蛋白酶PR1组成型表达工程菌株第46-56页
        3.3.1 类枯草杆菌蛋白酶Pr1基因丝状真菌表达元件的构建第47-49页
        3.3.2 含组成型Pr1基因表达元件和bar基因表达元件的根瘤农杆菌Ti质粒的构建第49-53页
        3.3.3 重组质粒pROKⅡ-bar-Pr1导入根瘤农杆菌LBA4404第53页
        3.3.4 组成型超表达Pr1蛋白酶布氏白僵菌工程菌株的构建第53-54页
        3.3.5 布氏白僵菌工程菌株Pr1蛋白酶酶活测定第54-56页
总结第56-57页
参考文献第57-61页
致谢第61-62页
学位论文评阅及答辩情况表第62页

 
 
论文编号BS3113128,这篇论文共62
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