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T7噬菌体展示人源抗体库筛选百草枯抗体
 
     论文目录
 
摘要第1-10页
Abstract第10-12页
縮略表第12-13页
第一章 前言第13-20页
 1 百草枯概述第13-15页
   ·百草枯中毒第13-14页
   ·百草枯治疗第14-15页
 2 噬菌体展示第15-18页
   ·噬菌体展示技术第15-16页
   ·基因工程抗体发现历史第16-17页
   ·噬菌体抗体库筛选方法第17-18页
   ·噬菌体抗体库筛查方法第18页
 3 研究目的和意义第18-19页
 4 研究的技术路线第19-20页
第二章 T7噬菌体外壳蛋白10A的表达、纯化及多抗制备第20-27页
 1 材料与方法第20-22页
   ·实验动物第20页
   ·主要试剂第20页
   ·主要仪器及耗材第20-21页
   ·主要溶液的配制第21-22页
     ·SDS-PAGE相关溶液的配制第21页
     ·培养基第21-22页
     ·ELISA相关溶液的配制第22页
 2 方法第22-24页
   ·噬菌体外壳蛋白10A的诱导表达第22-23页
   ·表达蛋白的纯化第23页
   ·多克隆抗体的制备第23页
   ·抗体的纯化第23页
   ·ELISA检测第23页
   ·Western blot分析第23-24页
   ·纯化多抗针对大肠杆菌BLT5615的结合第24页
 3 结果与分析第24-26页
   ·噬菌体外壳蛋白10A的诱导表达与纯化第24-25页
   ·抗血清的效价测定结果第25页
   ·Western blot鉴定第25页
   ·10A蛋白多抗在噬菌体展示筛查ELISA实验中浓度的确定第25-26页
 4. 讨论第26-27页
第三章 噬菌体全人源抗体库的构建第27-38页
 1 材料第27-28页
   ·主要试剂第27-28页
   ·主要仪器及耗材第28页
   ·主要溶液的配制第28页
 2 方法第28-35页
   ·引物设计与合成第28-30页
     ·克隆重链V_H的引物设计第29页
     ·克隆V_K轻链的引物设计第29-30页
     ·克隆轻链V_λ片断的引物设计第30页
   ·人外周血淋巴细胞的分离第30页
   ·总细胞RNA的提取(Trizol法)第30-31页
   ·cDNA的合成第31页
   ·全套抗体基因的克隆第31-33页
     ·抗体可变区反应体系第31-32页
     ·琼脂糖凝胶电泳紫外灯下回收PCR产物第32页
     ·V_H与V_L的拼接第32-33页
   ·T7噬菌体展示scFv初级库的构建第33-35页
     ·scFv片段的酶切第33页
     ·scFv片段与T7Select(?)10-3载体连接第33-34页
     ·重组T7噬菌体载体的体外包装第34页
     ·重组T7噬菌体滴度测定第34页
     ·重组噬菌体的扩增第34-35页
     ·初级库的PCR鉴定及测序第35页
 3 结果与分析第35-37页
   ·RNA提取第35页
   ·全套抗体重链、轻链的克隆第35-36页
   ·初级抗体库的滴度第36页
   ·初级抗体库的PCR鉴定第36-37页
 4 结论第37-38页
第四章 抗百草枯单链抗体的筛选与表达第38-48页
 1 材料与方法第38-40页
   ·主要试剂第38-39页
   ·主要仪器及耗材第39页
   ·主要溶液的配制第39-40页
     ·SDS-PAGE相关溶液的配制第39-40页
     ·培养基第40页
     ·ELISA相关溶液的配制第40页
 2 噬菌体抗体库的交替筛选第40-44页
   ·磁珠筛选第41-42页
     ·氨基化磁珠与羧基化百草枯的偶联与鉴定第41页
     ·磁珠法筛选第41-42页
   ·固相筛选第42页
   ·鉴定噬菌体抗体第42-43页
     ·ELISA鉴定噬菌体抗体第42-43页
     ·竞争ELISA鉴定第43页
   ·特异scFv抗体的表达第43页
   ·间接竞争ELISA测定表达后的scFv抗体特异性第43-44页
 3 结果与分析第44-47页
   ·磁珠偶联的鉴定第44页
   ·筛选结果第44-45页
   ·噬菌体抗体的鉴定第45页
   ·scFv的表达第45-47页
 4 结果与讨论第47-48页
第五章 全文总结第48-49页
参考文献第49-52页
致谢第52-53页
在读硕士期间发表文章第53页

 
 
论文编号BS1678929,这篇论文共53
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