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芪术建中汤对脾阳虚溃疡大鼠IL6和GAS影响的实验研究

【医学论文集】【摘要】 [目的]探讨芪术建中汤治疗脾阳虚胃溃疡的部分作用机理,客观阐明芪术建中汤的科学内涵。[方法]用SD大鼠60只,随机分正常/空白对照组、模型组、硫糖铝组、芪术建中汤大剂量组、芪术建中汤中剂量组、芪术建中汤小剂量组。除正常对照组外均采用饮食失节、劳倦失常加苦寒泻下法以及冷水刺激法建立脾阳虚胃溃疡大鼠模型。各组分别用药治疗后,测定大鼠血清中IL6和血清GAS的水平,并应用光镜观察胃粘膜的病理变化。[结果]与正常对照组相比,脾阳虚胃溃疡模型组大鼠血清中IL6升高、GAS水平下降;与脾阳虚胃溃疡模型组比较,使用硫糖铝、芪术建中汤高、中剂量均能显著降低脾阳虚胃溃疡模型大鼠血清中IL6水平,升高GAS水平,差异显著(P<0.01);而芪术建中汤低剂量组则与脾阳虚胃溃疡模型组无明显差异(P>0.05)。光镜结果显示芪术建中汤高剂量组、中剂量组、硫糖铝组胃黏膜损伤程度均轻于脾阳虚胃溃疡模型组,而芪术建中汤低剂量组胃黏膜损伤程度则与脾阳虚胃溃疡模型组相仿。[结论]芪术建中汤高、中剂量组均对脾阳虚胃溃疡有显著治疗作用,而芪术建中汤低剂量组则对脾阳虚胃溃疡无显著治疗作用。
【关键词】 芪术建中汤 脾阳虚胃溃疡 IL6 GAS SD大鼠
胃溃疡(gastric ulcer,GU)是全球性常见的多病因消化系统疾病,以各种性状的胃脘部位的疼痛为主症,往往兼见胃脘部痞满、胀闷、嗳气、吐酸等症状。中医认为,胃溃疡属于“脾虚”、“胃虚”、“脾胃虚寒”、“胃脘痛”、“吐酸”、“呕吐”、“反胃”等范畴。本课题拟从研究芪术建中汤对IL6、GAS的密切影响,力求从局部和整体相结合来揭示其治疗脾阳虚胃溃疡的作用机制,为脾阳虚胃溃疡的中西医结合诊疗提供客观的依据。
1 实验材料
1.1 药物 番泻叶水煎剂1∶1比例,冰醋酸,2%戊巴比妥钠溶液,芪术建中汤水煎剂药物组成及比例为:黄芪∶党参∶白术∶白芍∶陈皮∶炙甘草∶桂枝∶生麦芽∶大枣∶生姜=5∶4∶3∶5∶4∶2∶2∶5∶2∶3,制成100%浓缩溶液,硫糖铝片剂按人和动物折算公式把它溶于生理盐水制备成溶液,其含硫糖铝0.2g/2ml。
1.2 实验动物及分组 将实验大鼠随机分为两组,一组10只,作为正常对照组;另一组50只,为造模组,造模后再随机分为模型对照组、硫糖铝组、芪术建中汤大剂量组、芪术建中汤中剂量组、芪术建中汤小剂量组,每组10只。
1.3 主要试剂 IL6放射免疫试剂盒,GAS放射免疫试剂盒均购于北京普尔伟业生物科技有限公司 解放军总医院科技开发中心放免所。
1.4 主要实验仪器及设备 哺乳类动物手术器械(手术刀、组织剪、有齿镊、止血钳、12号灌胃针、5ml注射器、4号头皮针等)高速低温冷冻离心仪(中国科技大学实业总公司中佳光学仪器公司)、低温冰箱、电子秤(湖南仪器仪表总厂天平厂)。
2 实验方法
2.1 动物分组及造模 整个造模过程分为两大步骤。第一:脾阳虚造模,参照文献报道[2]综合造模法改进。第二:胃溃疡造模,参照文献报道[3]的综合造模法改进。
2.2 给药方法 正常对照组,模型对照组在造模成功后第2天,均灌服3ml/(kg·d)-1的生理盐水;硫糖铝治疗组灌服2ml/(200g·d)-1的硫糖铝水溶液;芪术建中汤大剂量组灌服14g/kg/日的芪术建中汤水煎剂;芪术建中汤中剂量组灌服7g/(kg·d)-1的芪术建中汤水煎剂;芪术建中汤低剂量组灌服3.5g/(kg·d)-1的芪术建中汤水煎剂。每天1次,连续灌服15d。
2.3 观察项目及检测方法
2.3.1 症状观察 实验期间,观察大鼠活动度、呼吸、毛发光泽、大便、情绪、食欲、死亡等,隔日称体重并记录。
2.3.2 生化检验及病理学检查 灌服15d后,股静脉取血,处理后严格按照试剂盒操作,用放免法测定各组大鼠血清中IL6和血清GAS的水平。最后放血处死大鼠,并取出其胃组织用10%甲醛固定,常规石蜡包埋,病理切片,HE染色,光镜下观察胃组织黏膜的损伤程度。
2.4 统计方法 用SPSS12.0对所得资料进行统计学处理,结果用均数加减标准差x±s表示,组间比较采用单因素方差分析,组内比较采用t检验。
3 实验结果
3.1 一般情况 在造模期间,正常对照组大鼠毛色有光泽,双眼灵活有神,行动敏捷,反应灵敏,不喜扎堆,大便不干不溏,食欲旺盛。余50只大鼠在造模第3天开始出现懒动,大便时干时溏,食欲下降;第4~6天上述症状加重,另外还出现倦怠,喜聚堆,游泳时间开始缩短,四肢不收;第7~15天,出现腹泻,甚有粘液或水样便,食欲明显下降,体重、肛温下降,倦怠嗜卧,畏冷倦缩,反应迟钝、毛色不荣;第15~21天,以上症状继续加重,躯体扭曲、后肢伸展并蠕行、皮毛枯槁散乱易脱落、肛周污浊,不能坚持游泳,个别动物出现脱肛;第22天,用冷水刺激后,除了上述脾阳虚症状外,大鼠四肢出现瘀血和缺血表现,不易唤醒,对外界刺激感觉降低,个别大鼠出现便血。在治疗期间,西药组大鼠体征有部分改善,如便血,食欲等;芪术建中汤中剂量组和芪术建中汤高剂量组大鼠各种症状全面改善,基本恢复到造模前的状态;芪术建中汤低剂量组大鼠症状则几乎无改善。
3.2 大鼠IL6、GAS含量变化的测定 模型组及芪术建中汤低剂量组大鼠血清IL6水平明显高于正常对照组、西药组及芪术建中汤中、高剂量组,与后四组比较有统计学意义(P<0.01);正常对照组、芪术建中汤高剂量组、芪术建中汤中剂量组及西药组之间无显著差异(P>0.05);芪术建中汤低剂量组与模型组之间无显著差异(P>0.05),见表1。
表1 各组大鼠IL6、GAS含量变化(略)
与正常组比较,#P<0.01、△P>0.05;与脾阳虚胃溃疡模型组比较●P<0.01;与硫糖铝组比较,▲P>0.05
3.3 病理改变 光镜下可见正常组胃黏膜形态、胞质、间质及横(纵)纹均为正常,而脾阳虚胃溃疡模型组和芪术建中汤低剂量组存在胃黏膜横(纵)纹不清,部分区域肌质纤维溶解,胞浆空泡变性,不同程度的炎症细胞浸润和问质水肿病变表现。芪术建中汤中剂量组、芪术建中汤高剂量组、硫糖铝组以上病变较脾阳虚胃溃疡模型有明显减轻,胃黏膜横(纵)纹较为清晰。
4 讨论
芪术建中汤是名老中医陈慈煦在黄芪建中汤基础上进行加减,由黄芪、白术、白芍、陈皮、炙甘草、桂枝、生姜、大枣等十多味药组成,主要功效为温阳健脾,缓急止痛,其主要用于治疗脾阳虚胃溃疡,疗效颇著,受到广大患者好评。
IL6是敏感反映机体炎症和组织损伤严重程度的重要指标。我们推测脾阳虚胃溃疡很可能是由于IL6及其受体的平衡失调,导致机体免疫功能低下,最后诱导溃疡的发生和发展。本实验结果显示,芪术建中汤中、高剂量组、硫糖铝组和正常对照组的IL6水平显著低于模型组及芪术建中汤低剂量组,而前四组之间的IL6水平无显著差异(P>0.05),提示芪术建中汤中、高剂量组能很好地调节IL6的水平,显著提高机体的免疫功能,从而增强胃粘膜对外来攻击因子的防御能力,为胃粘膜的修复打下基础;而芪术建中汤低剂量组则对IL6的水平影响不显著,不能有效地增强机体的免疫力,以帮助溃疡的修复。
胃泌素(GAS)是与胃溃疡(PU)密切相关的胃肠肽类激素之一,研究表明[5]胃泌素具有促进黏膜生长的作用,称为营养作用(tropicaction),可增进胃体黏膜DNA合成,增加细胞内RNA和蛋白质的含量。因此,推测芪术建中汤是通过升高GAS的水平,来加速促进黏膜生长,从而起到愈合胃溃疡的作用。本实验结果显示,正常对照组、硫糖铝组、芪术建中汤高剂量组、芪术建中汤中剂量组的GAS水平均显著高于模型组及芪术建中汤低剂量组,提示芪术建中汤中、高剂量和硫糖铝均能很好地促进溃疡的愈合。
综合来看,芪术建中汤中剂量和芪术建中汤高剂量均对脾阳虚胃溃疡有较好的治疗效果,两者之间无明显的差异(P>0.05),但芪术建中汤小剂量则对脾阳虚胃溃疡无明显治疗效果,这表明芪术建中汤中剂量为治疗脾阳虚胃溃疡的有效剂量,又是治疗脾阳虚胃溃疡的理想剂量。芪术建中汤中、高剂量和西药硫糖铝对脾阳虚胃溃疡有着相似的治疗效果,但就改善脾阳虚胃溃疡大鼠的整体情况来看,前两者占有一定的优势。因此,用芪术建中汤治疗脾阳虚胃溃疡有较大的发展前景,我们要加强对该方的科学研究,使之能更好地被开发利用,以服务于临床。
【参考文献】
[1] 刘雪梅.胃溃疡幽门螺旋杆菌感染的治疗体会[J].中国实用医刊,2008,35(3):6061.
[2] 陈氏.大建中汤对脾阳虚大鼠TXB2及6KetoPGFα的影响[J].江苏中医药,2003,24(2):49.
[3] 卢广翔.中药(心身1号)对应激性溃疡模型大鼠保护机制的实验研究[J].天津中医药大学学报,2007,26(2):53.
[4] 王治伟.胃癌患者血清白介素6肿瘤坏死因子α水平的检测[J].广州医药,2007,38(2):58.
[5] 马燕妮.胃肠激素生理调节功能的研究[J].中华实用中西医杂志,2008,21(5):21.

 
 
 
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