| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| ·对虾白斑综合症及其病原 | 第13-16页 |
| ·WSSV基因组 | 第14页 |
| ·WSSV结构蛋白 | 第14-15页 |
| ·WSSV的复制 | 第15-16页 |
| ·对虾的获得性免疫 | 第16-23页 |
| ·无脊椎动物及对虾获得性免疫现象 | 第16-18页 |
| ·无脊椎动物获得性免疫分子基础 | 第18页 |
| ·粘附分子 | 第18-20页 |
| ·无脊椎动物获得性免疫机制 | 第20页 |
| ·无脊椎动物的特异性免疫机制 | 第20页 |
| ·无脊椎动物对病毒性感染的免疫应答机制 | 第20-21页 |
| ·对虾保护性免疫反应及其机制 | 第21-22页 |
| ·对虾人工免疫途径 | 第22-23页 |
| ·芽孢及芽孢表面展示重组疫苗 | 第23-27页 |
| ·枯草芽孢杆菌芽孢结构 | 第23-24页 |
| ·枯草芽孢杆菌芽孢生理及理化特性 | 第24页 |
| ·枯草芽孢杆菌芽孢作为疫苗载体的由来 | 第24-25页 |
| ·芽孢表面展示疫苗载体系统 | 第25-26页 |
| ·芽孢载体表面展示重组疫苗的机体免疫类型 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的和总体设计 | 第27-29页 |
| 第二章 以COTX为分子载体在枯草芽孢杆菌芽孢表面展示外源蛋白的研究 | 第29-39页 |
| ·材料与方法 | 第29-33页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第29-30页 |
| ·分子生物学操作 | 第30-31页 |
| ·枯草芽孢杆菌的转化 | 第31页 |
| ·枯草芽孢杆菌淀粉酶活性分析 | 第31-32页 |
| ·枯草芽孢杆菌芽孢的诱导和显微拍摄 | 第32-33页 |
| ·结果 | 第33-37页 |
| ·融合表达CotX-GFP的整合型重组质粒及重组菌株的构建策略 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pJS747的构建 | 第34页 |
| ·融合表达CotX-GFP整合型重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·融合表达CotX-GFP重组枯草芽孢杆菌的构建 | 第35-37页 |
| ·表面展示gfp的重组芽孢鉴定 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 兔抗VP19和VP28多克隆抗体的制备 | 第39-47页 |
| ·材料和方法 | 第39-41页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第39页 |
| ·WSSV染色体提取 | 第39页 |
| ·分子生物学操作 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第40页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·重组蛋白免疫接种新西兰大白兔 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白斑点印迹试验 | 第41页 |
| ·结果和讨论 | 第41-47页 |
| ·诱导表达Vp19和Vp28重组蛋白的重组质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·Vp19和Vp28重组蛋白的诱导表达和纯化 | 第42-44页 |
| ·兔抗Vp19和Vp28多克隆抗体效价 | 第44-45页 |
| ·兔抗Vp19和Vp28多克隆抗体特异性 | 第45-47页 |
| 第四章 表面展示VP19/VP28重组芽孢的构建 | 第47-58页 |
| ·材料与方法 | 第47-51页 |
| ·菌株、培养基及试剂 | 第47-49页 |
| ·分子生物学操作 | 第49页 |
| ·WSSV染色体DNA的提取 | 第49页 |
| ·融合表达Vp19和Vp28整合型重组质粒的构建策略 | 第49-50页 |
| ·重组菌株及芽孢的鉴定 | 第50-51页 |
| ·Western印迹分析 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-56页 |
| ·质粒pJS747的构建 | 第51-52页 |
| ·质粒pJS748的构建 | 第52-53页 |
| ·整合型重组质粒pJS747,pJS748转化枯草芽孢杆菌与转化子的鉴定 | 第53-54页 |
| ·表面展示Vp19和Vp28的重组芽孢的荧光免疫检测 | 第54-56页 |
| ·Western blot分析表面展示Vp19和Vp28重组芽孢 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 克氏螯虾口服重组芽孢的免疫作用及其稳定性 | 第58-65页 |
| ·材料和方法 | 第58-60页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·重组芽孢的包被 | 第58-59页 |
| ·克氏原螯虾的养殖与口服接种重组芽孢 | 第59页 |
| ·WSSV感染性悬液制备及WSSV的滴定 | 第59页 |
| ·WSSV攻击试验和数据统计 | 第59-60页 |
| ·枯草芽孢杆菌芽孢在海水中的萌发试验 | 第60页 |
| ·结果 | 第60-63页 |
| ·重组芽孢在海水中的稳定性 | 第60-61页 |
| ·口服接种重组芽孢14天后克氏原螯虾抗WSSV感染能力的分析 | 第61-62页 |
| ·口服接种重组芽孢21天后克氏原螯虾抗WSSV感染能力的分析 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第六章 主要结论与展望 | 第65-67页 |
| ·本研究的主要结论包括 | 第65页 |
| ·研究展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 硕士期间发表的学术论文及申请专利 | 第79-80页 |
| 附录Ⅰ 实验设备及主要仪器 | 第80-81页 |
| 附录Ⅱ 缩略语表 | 第81-82页 |
| 附录Ⅲ 主要试剂及配制 | 第82-83页 |
| 1 质粒提取及纯化缓冲液 | 第82页 |
| 2 电泳缓冲液 | 第82页 |
| 3 大肠杆菌感受态细胞制备缓冲液FSB | 第82页 |
| 4 饱和苯酚溶液的配置 | 第82页 |
| 5 细菌培养基 | 第82-83页 |
| 附录Ⅳ 主要试剂 | 第83页 |
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