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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--假单胞菌L-1菌株(Pseudomonas sp.L-1 strain)L-肉碱代谢酶系及转化研究
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假单胞菌L-1菌株(Pseudomonas sp.L-1 strain)L-肉碱代谢酶系及转化研究
 
     论文目录
 
致谢第1-10页
摘要第10-12页
Abstract第12-14页
第一章 文献综述第14-26页
 前言第14页
   ·L-肉碱的结构与生理功能第14-16页
   ·L-肉碱的应用第16-20页
     ·L-肉碱在医药领域的应用第16-18页
       ·L-肉碱在心血管系统疾病中的应用第16-17页
       ·L-肉碱与男科疾病第17页
       ·乙酰肉碱在神经系统疾病中的应用第17页
       ·L-肉碱在血液透析及肾功能紊乱患者中的应用第17-18页
       ·L-肉碱与其他疾病第18页
     ·L-肉碱在食品行业的应用第18-19页
       ·L-肉碱作为营养强化剂第18-19页
       ·L-肉碱作为运动员营养补充剂第19页
       ·L-肉碱在减肥食品中应用第19页
     ·L-肉碱作为饲料添加剂第19-20页
   ·L-肉碱的合成与代谢第20-22页
     ·L-肉碱在高等动物体内的合成与代谢第20页
     ·L-肉碱在微生物中的合成第20-21页
     ·L-肉碱在微生物中的降解第21-22页
   ·L-肉碱代谢相关酶的研究现状第22-24页
     ·L-肉碱合成相关酶的研究第22-23页
     ·L-肉碱降解相关酶的研究第23-24页
   ·L-肉碱的生产第24页
   ·本研究的目的及内容第24-26页
第二章 产L-肉碱菌株的分离及鉴定第26-40页
   ·材料第26-27页
     ·菌株的分离源第26页
     ·试验仪器第26页
     ·培养基第26-27页
   ·试验方法第27-33页
     ·季铵盐法的建立第27-28页
       ·最佳测试pH及最佳吸光值测定波长的确定第27-28页
       ·标准曲线的绘制第28页
     ·气相色谱法(内标法)精确测定培养液中γ-丁基甜菜碱浓度第28页
     ·肉碱脱氢酶活性的测定第28-29页
       ·粗酶液的制备第28-29页
       ·L-肉碱脱氢酶活性测定第29页
       ·D-肉碱脱氢酶活性测定第29页
     ·菌种筛选第29-30页
       ·菌种初筛第29-30页
       ·菌种复筛第30页
     ·分离菌株L-1的鉴定第30-33页
       ·细菌的形态观察第30页
       ·生理生化鉴定第30-31页
       ·16S rDNA序列测定第31-32页
       ·基于16S rDNA序列的系统发育分析第32-33页
   ·结果与分析第33-39页
     ·季铵盐法的建立第33-34页
       ·最佳测试pH及最佳吸光值测定波长的确定第33-34页
       ·标准曲线的绘制第34页
     ·产L-肉碱菌株的筛选第34-35页
     ·菌株L-1的鉴定第35-39页
       ·菌株L-1的形态学鉴定第35页
       ·菌株L-1生理生化特征第35-38页
       ·菌株L-1的16S rDNA序列测定及系统发育分析第38-39页
   ·结论第39-40页
第三章 菌株L-1的γ-丁基甜菜碱羟化酶基因(bbh)的克隆与表达第40-54页
   ·材料第40-42页
     ·菌种和载体第40页
     ·主要试剂第40页
     ·常用培养基和缓冲液第40-41页
     ·常用仪器第41-42页
   ·方法第42-47页
     ·DNA操作第42页
     ·感受态细胞的制备第42页
     ·菌株L-1的bbh基因扩增及测序第42-43页
     ·多重比对及系统发育分析第43-44页
     ·三维结构预测第44页
     ·限制性内切酶双酶切第44页
     ·连接及转化第44-45页
     ·转化子的挑选及鉴定第45页
     ·9 E.coli BL21(DE3)的转化及诱导表达第45-46页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第46-47页
   ·结果和讨论第47-53页
     ·菌株L-1的bbh基因的扩增第47-49页
     ·多重比对及系统发育分析第49-50页
     ·BBH三维结构预测第50-51页
     ·重组质粒pET-15b-BBH的构建及融合蛋白的诱导表达第51-53页
   ·结论第53-54页
第四章 重组γ-丁基甜菜碱羟化酶的纯化及性质研究第54-64页
   ·材料第54-55页
     ·材料和试剂第54页
     ·培养基及缓冲液第54-55页
     ·主要仪器第55页
   ·方法第55-58页
     ·菌体大量培养第55页
     ·重组酶的纯化第55-56页
     ·重组蛋白酶性质研究第56-57页
       ·重组蛋白分子量的确定第56页
       ·γ-丁基甜菜碱羟化酶活性测定第56-57页
       ·最适反应温度及热稳定性第57页
       ·最适反应pH及pH稳定性第57页
     ·重组大肠杆菌静止细胞与纯化的BBH分别转化生产L-肉碱第57-58页
   ·结果与分析第58-63页
     ·重组酶的纯化及分子量测定第58-60页
     ·最适反应温度及热稳定性第60-61页
     ·最适反应pH及pH稳定性第61-62页
     ·重组大肠杆菌静止细胞与纯化的BBH分别转化生产L-肉碱第62-63页
   ·结论第63-64页
第五章 菌株L-1的L-肉碱脱氢酶基因cdh的敲除及γ-丁基甜菜碱代谢途径研究第64-80页
   ·材料第64-66页
     ·菌种和质粒第64页
     ·主要试剂第64-65页
     ·常用培养基和缓冲液第65-66页
     ·主要仪器第66页
   ·方法第66-73页
     ·DNA操作第66页
     ·感受态细胞的制备第66-67页
     ·菌株L-1的cdh基因扩增及测序第67-68页
     ·菌株L-1的L-肉碱脱氢酶的重组表达第68-69页
     ·重组L-肉碱脱氢酶的酶活测试及SDS-PAGE电泳分析第69页
     ·敲除用载体pK18mobsacB-△cdh的构建第69-71页
     ·菌株L-1与含质粒pK18mobsacB-△cdh的WM3064进行接合第71-72页
     ·突变体L-1-△cdh的筛选第72页
     ·菌株L-1与L-1-△cdh肉碱积累量的比较第72页
     ·HPLC-M5分析第72-73页
   ·结果和分析第73-79页
     ·菌株L-1的cdh基因扩增及测序第73-75页
     ·菌株L-1的L-肉碱脱氢酶的重组表达第75-76页
     ·菌株L-1的L-肉碱脱氢酶基因的敲除第76-78页
     ·菌株L-1与L-1-△cdh肉碱积累量的比较第78-79页
   ·结论第79-80页
第六章 结论与展望第80-83页
   ·研究结论第80-81页
     ·转化γ-丁基甜菜碱生成L-肉碱的菌株的分离和鉴定第80页
     ·γ-丁基甜菜碱羟化酶基因(bbh)的克隆与表达第80页
     ·重组γ-丁基甜菜碱羟化酶的纯化及性质研究第80-81页
     ·菌株L-1的L-肉碱脱氢酶基因cdh的敲除第81页
   ·创新点第81-82页
   ·展望第82-83页
参考文献第83-89页

 
 
论文编号BS92383,这篇论文共89
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