| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| ·海水养殖鱼类细胞系的应用 | 第11-15页 |
| ·穿膜肽蛋白研究进展 | 第15-18页 |
| ·本课题的基本思路 | 第18-19页 |
| 第二章 原核表达载体pET32a-Oct4-11R 与pET32a -Sox2-11R 的构建 | 第19-33页 |
| ·实验用品 | 第19-20页 |
| ·主要实验仪器 | 第19-20页 |
| ·实验试剂 | 第20页 |
| ·培养基和常用溶液配制 | 第20页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-26页 |
| ·引物的设计与合成 | 第20-21页 |
| ·红鳍东方鲀基因组DNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·PCR 扩增Oct4 与Sox2 基因 | 第22页 |
| ·PCR 产物的凝胶回收 | 第22-23页 |
| ·扩增产物与pMD18-T 载体的连接 | 第23页 |
| ·两种T 载体质粒向大肠杆菌转化 | 第23-24页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第24页 |
| ·表达载体与基因的限制性内切酶酶切 | 第24-25页 |
| ·酶切后基因片段与原核表达载体pET32a 的体外连接 | 第25页 |
| ·重组表达载体向大肠杆菌的转化 | 第25-26页 |
| ·表达载体的酶切鉴定 | 第26页 |
| ·结果与分析 | 第26-30页 |
| ·获得两种特异PCR 产物 | 第26-28页 |
| ·重组表达载体的构建与酶切鉴定 | 第28-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| ·两种重编程因子的选择 | 第30-31页 |
| ·关于两种目的基因的扩增 | 第31页 |
| ·重组载体的连接和鉴定 | 第31-32页 |
| ·本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 重组原核表达载体在大肠杆菌中的诱导表达及重组蛋白的纯化、复性 | 第33-46页 |
| ·实验用品 | 第33-36页 |
| ·主要实验仪器 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·所用溶液的配制 | 第34-36页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| ·pET32a-oct4-11R 与pET32a-sox2-11R 重组载体的原核表达 | 第36页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·变性蛋白的透析复性 | 第37页 |
| ·超滤与除菌 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-42页 |
| ·两种重组载体的原核表达 | 第38-39页 |
| ·超声破菌方法的最适条件 | 第39-40页 |
| ·在最适诱导条件及破菌条件下两种重组载体的原核表达 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第41页 |
| ·非变性重组蛋白的除盐浓缩与变性蛋白的复性、浓缩 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-45页 |
| ·pET32 原核表达载体的选择 | 第42页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株的选择 | 第42页 |
| ·超声破菌方法的最适条件 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·包涵体的形成与影响其形成的因素 | 第44页 |
| ·Sox2 包涵体蛋白的复性及除盐 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第四章 重组蛋白导入红鳍东方鲀精巢细胞 | 第46-57页 |
| ·实验用品 | 第46-48页 |
| ·主要实验仪器 | 第46-47页 |
| ·实验试剂 | 第47页 |
| ·实验中所用溶液配制方法 | 第47-48页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·两种重组蛋白的浓度测定 | 第48-49页 |
| ·确定重组蛋白进入细胞的最佳浓度 | 第49-50页 |
| ·免疫荧光检测两种重组蛋白在红鳍东方鲀细胞内的定位 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-55页 |
| ·检测重组蛋白进入细胞的最佳浓度结果 | 第51-53页 |
| ·免疫荧光检测重组蛋白在红鳍东方鲀精巢细胞内的定位 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第63页 |
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