| 致谢 | 第4-9页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-18页 |
| 1 犊牛腹泻概述 | 第11-13页 |
| 1.1 发病规律 | 第11页 |
| 1.2 危害 | 第11页 |
| 1.3 主要致病因素及发病机理 | 第11-13页 |
| 1.3.1 细菌性腹泻 | 第11-12页 |
| 1.3.2 病毒性腹泻 | 第12-13页 |
| 1.3.3 原虫 | 第13页 |
| 2 犊牛腹泻病料采集与病原诊断技术 | 第13-17页 |
| 2.1 犊牛腹泻实验室诊断样品的采集与储存 | 第13页 |
| 2.2 病原诊断技术 | 第13-17页 |
| 2.2.1 电镜观察 | 第13-14页 |
| 2.2.2 病毒分离 | 第14页 |
| 2.2.3 粪便细菌培养鉴定法 | 第14页 |
| 2.2.4 粪便浮选直接显微镜检法 | 第14页 |
| 2.2.5 酶联免疫吸附检测技术（Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA） | 第14-15页 |
| 2.2.6 聚合酶链式反应检测技术（Polymerase Chain Reaction, PCR） | 第15-16页 |
| 2.2.7 环介导等温扩增检测技术（loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP） | 第16页 |
| 2.2.8 基因芯片检测方法（microfluidic chips） | 第16-17页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 3.1 犊牛腹泻主要病原PCR鉴定方法建立 | 第17页 |
| 3.2 河南省犊牛腹泻病原流行情况调查 | 第17页 |
| 3.3 犊牛腹泻微流控基因芯片部分指标的验证 | 第17-18页 |
| 试验一 犊牛腹泻主要病原PCR鉴定方法的建立 | 第18-38页 |
| 1 试验材料 | 第18-19页 |
| 1.1 试验材料 | 第18页 |
| 1.2 试验试剂 | 第18页 |
| 1.3 试验仪器 | 第18-19页 |
| 2 犊牛腹泻隐孢子虫巢式PCR鉴定方法建立 | 第19-25页 |
| 2.1 材料 | 第19页 |
| 2.2 试剂 | 第19页 |
| 2.3 仪器 | 第19页 |
| 2.4 方法 | 第19-21页 |
| 2.4.1 犊牛腹泻微小隐孢子虫ELISA鉴定法 | 第19-20页 |
| 2.4.2 犊牛腹泻隐孢子虫PCR鉴定 | 第20-21页 |
| 2.5 数据分析 | 第21页 |
| 2.6 结果与比较 | 第21-25页 |
| 2.6.1 结果 | 第21-24页 |
| 2.6.2 两种方法检测结果比较 | 第24-25页 |
| 3 犊牛腹泻轮状病毒A群RT-PCR鉴定方法的建立 | 第25-29页 |
| 3.1 材料 | 第25页 |
| 3.2 试剂 | 第25页 |
| 3.3 仪器 | 第25页 |
| 3.4 方法 | 第25-27页 |
| 3.4.1 犊牛腹泻轮状病毒ELISA鉴定法 | 第25-26页 |
| 3.4.2 犊牛腹泻轮状病毒A群RT-PCR鉴定 | 第26-27页 |
| 3.5 数据分析 | 第27页 |
| 3.6 结果与比较 | 第27-29页 |
| 3.6.1 结果 | 第27-28页 |
| 3.6.2 两种方法检测结果比较 | 第28-29页 |
| 4 犊牛腹泻冠状病毒RT-PCR鉴定方法的建立 | 第29-33页 |
| 4.1 材料 | 第29页 |
| 4.2 试剂 | 第29页 |
| 4.3 仪器 | 第29页 |
| 4.4 方法 | 第29-31页 |
| 4.4.1 犊牛腹泻轮状病毒ELISA鉴定法 | 第29-30页 |
| 4.4.2 犊牛腹泻轮状病毒A群RT-PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 4.5 数据分析 | 第31页 |
| 4.6 结果与比较 | 第31-33页 |
| 4.6.1 结果 | 第31-32页 |
| 4.6.2 两种方法检测结果比较 | 第32-33页 |
| 5 犊牛腹泻大肠杆菌K99~+PCR鉴定方法的建立 | 第33-35页 |
| 5.1 材料 | 第33页 |
| 5.2 试剂 | 第33页 |
| 5.3 仪器 | 第33页 |
| 5.4 方法 | 第33-34页 |
| 5.4.1 犊牛腹泻大肠杆菌K99~+ELISA鉴定法 | 第33页 |
| 5.4.2 犊牛腹泻大肠杆菌K99~+PCR鉴定法 | 第33-34页 |
| 5.5 数据分析 | 第34页 |
| 5.6 结果与比较 | 第34-35页 |
| 5.6.1 结果 | 第34-35页 |
| 5.6.2 两种方法检测结果比较 | 第35页 |
| 6 四种病原ELISA方法和PCR方法检测成本、可操作性比较 | 第35-36页 |
| 7 讨论 | 第36页 |
| 7.1 四种病原ELISA方法和PCR方法阳性检出率 | 第36页 |
| 7.2 四种病原ELISA方法和PCR方法成本、可操作性 | 第36页 |
| 8 结论 | 第36-38页 |
| 试验二 河南省犊牛腹泻主要病原调查 | 第38-51页 |
| 1 试验材料 | 第38页 |
| 1.1 试验材料 | 第38页 |
| 1.2 试验仪器 | 第38页 |
| 1.3 试验试剂 | 第38页 |
| 2 试验方法 | 第38-39页 |
| 2.1 样品采集与运输 | 第38-39页 |
| 2.2 样品的保存 | 第39页 |
| 3 犊牛腹泻隐孢子虫调查 | 第39-42页 |
| 3.1 粪便样品核酸提取 | 第39页 |
| 3.2 隐孢子虫引物的设计与合成 | 第39页 |
| 3.3 PCR扩增 | 第39页 |
| 3.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第39页 |
| 3.5 PCR扩增产物的序列测定 | 第39页 |
| 3.6 数据分析 | 第39页 |
| 3.7 结果及序列分析 | 第39-42页 |
| 4 犊牛腹泻轮状病毒A群调查 | 第42-44页 |
| 4.1 粪便样品病毒RNA提取 | 第42页 |
| 4.2 RNA浓度测定 | 第42页 |
| 4.3 RT-PCR反应 | 第42页 |
| 4.4 轮状病毒A群引物设计与合成 | 第42页 |
| 4.5 PCR扩增 | 第42页 |
| 4.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第42页 |
| 4.7 PCR扩增产物的序列测定 | 第42页 |
| 4.8 数据分析 | 第42-43页 |
| 4.9 结果及序列分析 | 第43-44页 |
| 5 犊牛腹泻冠状病毒调查 | 第44-45页 |
| 5.1 粪便样品病毒RNA提取 | 第44页 |
| 5.2 RNA浓度测定 | 第44页 |
| 5.3 RT-PCR反应 | 第44页 |
| 5.4 引物设计与合成 | 第44页 |
| 5.5 PCR扩增 | 第44页 |
| 5.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第44页 |
| 5.7 PCR扩增产物的序列测定 | 第44页 |
| 5.8 数据分析 | 第44页 |
| 5.9 结果及序列分析 | 第44-45页 |
| 6 犊牛腹泻大肠杆菌K99~+调查 | 第45-47页 |
| 6.1 粪便样品核酸提取 | 第45页 |
| 6.2 大肠杆菌K99~+引物的设计与合成 | 第45页 |
| 6.3 PCR扩增 | 第45页 |
| 6.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第45页 |
| 6.5 PCR扩增产物的序列测定 | 第45页 |
| 6.6 数据分析 | 第45-46页 |
| 6.7 结果及序列分析 | 第46-47页 |
| 7 结果与分析 | 第47-49页 |
| 7.1 全省犊牛腹泻病原流行情况 | 第47-48页 |
| 7.2 犊牛腹泻病原地区流行情况 | 第48-49页 |
| 8 讨论 | 第49-50页 |
| 9 结论 | 第50-51页 |
| 9.1 河南省犊牛腹泻病原流行情况 | 第50页 |
| 9.2 犊牛腹泻病原检测方法 | 第50-51页 |
| 试验三 犊牛腹泻微流控基因芯片部分指标的验证 | 第51-54页 |
| 1 试验材料 | 第51页 |
| 1.1 试验样品 | 第51页 |
| 1.2 试验仪器 | 第51页 |
| 1.3 试验试剂 | 第51页 |
| 2 试验方法 | 第51-53页 |
| 2.1 提取样品核酸 | 第51-52页 |
| 2.2 芯片加样 | 第52页 |
| 2.3 上机检测与结果判读 | 第52-53页 |
| 3 检测结果 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 创新点 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 攻读硕士期间成果汇总 | 第60-61页 |
| 1 论文 | 第60页 |
| 1.1 已见刊论文 | 第60页 |
| 1.2 已接收论文 | 第60页 |
| 2 软件著作权 | 第60页 |
| 3 发明专利 | 第60-61页 |
| ABSTRACT | 第61-62页 |
| 附表 | 第63-69页 |
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