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RF-SRCA方法检测抗除草剂草甘膦大豆及其制品的研究 |
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| 摘要 | 第4-6页 | | Abstract | 第6-8页 | | 1 引言 | 第12-26页 | | 1.1 立题背景与意义 | 第12-13页 | | 1.2 转基因作物概述 | 第13-14页 | | 1.3 转基因大豆概述 | 第14-15页 | | 1.4 转基因作物的安全性 | 第15页 | | 1.5 转基因食品的管理 | 第15-16页 | | 1.6 国内外转基因食品检测方法研究进展 | 第16-21页 | | 1.6.1 基于蛋白质的检测方法 | 第16-17页 | | 1.6.2 基于DNA的检测方法 | 第17-20页 | | 1.6.3 其他检测方法 | 第20-21页 | | 1.7 跨越式滚环等温扩增技术 | 第21-22页 | | 1.7.1 SRCA技术概述 | 第21页 | | 1.7.2 SRCA技术扩增原理 | 第21-22页 | | 1.7.3 SRCA技术的优点与局限性 | 第22页 | | 1.8 实时荧光跨越式滚环等温扩增方法 | 第22-24页 | | 1.8.1 RF-SRCA方法概述 | 第22-23页 | | 1.8.2 荧光染料的选择 | 第23页 | | 1.8.3 RF-SRCA扩增结果判定方法 | 第23-24页 | | 1.9 本研究主要内容 | 第24-25页 | | 1.10 本研究技术路线 | 第25-26页 | | 2 材料与方法 | 第26-39页 | | 2.1 材料与试剂 | 第26-28页 | | 2.1.1 试验材料 | 第26-27页 | | 2.1.2 试验试剂 | 第27页 | | 2.1.3 试验仪器与设备 | 第27-28页 | | 2.2 试验方法 | 第28-32页 | | 2.2.1 基因组DNA的提取 | 第28页 | | 2.2.2 基因组DNA浓度及纯度测定 | 第28页 | | 2.2.3 引物设计 | 第28-30页 | | 2.2.4 引物稀释及保存 | 第30页 | | 2.2.5 RF-SRCA预反应体系 | 第30-31页 | | 2.2.6 RF-SRCA预反应条件和预反应程序 | 第31页 | | 2.2.7 RT-PCR反应体系和反应程序 | 第31-32页 | | 2.2.8 RT-LAMP反应体系和反应程序 | 第32页 | | 2.3 RF-SRCA反应条件和反应体系的优化 | 第32-34页 | | 2.3.1 反应温度的优化 | 第32-33页 | | 2.3.2 MgSO_4添加量的优化 | 第33页 | | 2.3.3 dNTPs添加量的优化 | 第33页 | | 2.3.4 BstDNA聚合酶缓冲液添加量的优化 | 第33-34页 | | 2.3.5 引物添加量的优化 | 第34页 | | 2.3.6 BstDNA聚合酶添加量的优化 | 第34页 | | 2.3.7 荧光染料添加量的优化 | 第34页 | | 2.4 RF-SRCA扩增结果分析 | 第34-35页 | | 2.4.1 实时荧光扩增曲线法结果分析 | 第34-35页 | | 2.4.2 可视化法结果分析 | 第35页 | | 2.4.3 凝胶电泳法结果分析 | 第35页 | | 2.5 RF-SRCA扩增产物测序分析 | 第35-36页 | | 2.6 引物特异性分析 | 第36页 | | 2.7 灵敏度分析 | 第36-37页 | | 2.7.1 RF-SRCA灵敏度分析 | 第36页 | | 2.7.2 RT-PCR灵敏度分析 | 第36页 | | 2.7.3 RT-LAMP灵敏度分析 | 第36-37页 | | 2.7.4 RF-SRCA、RT-PCR和RT-LAMP的灵敏度比较 | 第37页 | | 2.8 检出限分析 | 第37-38页 | | 2.8.1 人工加标样品处理 | 第37页 | | 2.8.2 RF-SRCA检出限分析 | 第37页 | | 2.8.3 RT-PCR检出限分析 | 第37页 | | 2.8.4 RT-LAMP检出限分析 | 第37页 | | 2.8.5 RF-SRCA、RT-PCR和RT-LAMP的检出限比较 | 第37-38页 | | 2.9 RF-SRCA方法的实际应用 | 第38-39页 | | 3 结果与分析 | 第39-58页 | | 3.1 模板DNA质量测定结果分析 | 第39页 | | 3.2 模板DNA质量控制结果分析 | 第39-40页 | | 3.3 RF-SRCA反应条件和反应体系的优化 | 第40-44页 | | 3.3.1 反应温度的优化 | 第40-41页 | | 3.3.2 MgSO_4添加量的优化 | 第41页 | | 3.3.3 dNTPs添加量的优化 | 第41-42页 | | 3.3.4 BstDNA聚合酶缓冲液添加量的优化 | 第42页 | | 3.3.5 引物添加量的优化 | 第42-43页 | | 3.3.6 BstDNA聚合酶添加量的优化 | 第43页 | | 3.3.7 荧光染料EvaGreen添加量的优化 | 第43-44页 | | 3.4 RF-SRCA最终反应条件和反应体系 | 第44页 | | 3.5 RF-SRCA扩增结果分析 | 第44-46页 | | 3.5.1 实时荧光扩增曲线法扩增结果分析 | 第44-45页 | | 3.5.2 可视化法扩增结果分析 | 第45页 | | 3.5.3 凝胶电泳法扩增结果分析 | 第45-46页 | | 3.6 RF-SRCA扩增产物测序分析 | 第46-47页 | | 3.7 RF-SRCA引物特异性验证 | 第47-50页 | | 3.7.1 实时荧光扩增曲线法特异性分析 | 第48页 | | 3.7.2 可视化法特异性分析 | 第48-49页 | | 3.7.3 凝胶电泳法特异性分析 | 第49-50页 | | 3.8 灵敏度分析 | 第50-53页 | | 3.8.1 RF-SRCA实时荧光扩增曲线法灵敏度测定 | 第50-51页 | | 3.8.2 RF-SRCA可视化法灵敏度测定 | 第51页 | | 3.8.3 RF-SRCA凝胶电泳法灵敏度测定 | 第51-52页 | | 3.8.4 RT-PCR灵敏度测定 | 第52-53页 | | 3.8.5 RT-LAMP灵敏度测定 | 第53页 | | 3.9 检出限分析 | 第53-56页 | | 3.9.1 RF-SRCA实时荧光扩增曲线法检出限测定 | 第53-54页 | | 3.9.2 RF-SRCA可视化法检出限测定 | 第54页 | | 3.9.3 RF-SRCA凝胶电泳法检出限测定 | 第54-55页 | | 3.9.4 RT-PCR检出限测定 | 第55-56页 | | 3.9.5 RT-LAMP检出限测定 | 第56页 | | 3.10 RF-SRCA方法的应用与评价 | 第56-58页 | | 4 讨论 | 第58-62页 | | 4.1 RF-SRCA方法评价 | 第58页 | | 4.2 RF-SRCA方法的优势 | 第58-59页 | | 4.3 不同转基因作物检测方法的比较 | 第59-60页 | | 4.4 大豆基因组DNA的提取和质量控制 | 第60页 | | 4.5 影响RF-SRCA反应的主要因素 | 第60-61页 | | 4.5.1 靶基因的选择 | 第60页 | | 4.5.2 引物设计 | 第60-61页 | | 4.5.3 其他影响因素 | 第61页 | | 4.6 RF-SRCA反应注意事项 | 第61-62页 | | 5 结论与展望 | 第62-64页 | | 5.1 结论 | 第62-63页 | | 5.2 展望 | 第63-64页 | | 参考文献 | 第64-73页 | | 作者简历 | 第73-74页 | | 硕士期间发表学术论文 | 第74-75页 | | 致谢 | 第75页 |
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