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维胃方对乙酸诱导大鼠胃溃疡愈合效果及血清GAS,EGF水平的影响

【妇产科西医学论文】【摘要】 目的探讨维胃方对消化性溃疡病愈合情况的 影响 及作用机制。 方法 采用乙酸诱导大鼠胃溃疡模型。观察维胃方对大鼠溃疡面积的改变;检测大鼠胃液pH值变化;通过石蜡包埋、病理切片染色观察溃疡愈合质量,并进行镜下 分析 ;采用放射性免疫法(RIA)检测大鼠血清表皮生长因子(EGF)和胃泌素(GAS)水平的变化。结果①镜下可见维胃方 治疗 的大鼠胃黏膜造模处溃疡愈合情况较好,其中以中剂量组的效果最好;②模型组与各用药组比较,胃液pH值变化明显(P<0.05);③而在溃疡面积的治疗效果比较中,维胃方各治疗组与对照组相比较有显著意义(P<0.05),其中以维胃方中剂量组值最小,疗效最好〔(0.76±0.30)mm2,P<0.01〕;④维胃方治疗的3组大鼠血清GAS均数都高于模型组和对照组,但其差异并无统计学意义;⑤而经维胃方治疗的大鼠血清EGF水平均有所降低,其中以维胃方中剂量组治疗效果最显著〔(0.252 5±0.549 7 ng/ml),P<0.01〕。结论维胃方对消化性溃疡有较好的治疗效果,其作用机制与防御因子GAS,EGF的变化有关系。
【关键词】 维胃方 消化性溃疡 表皮生长因子 胃泌素 溃疡愈合效果
The rapeutic Effect of WeiWeiFang(WWF) on Acetic Acid-induced Gastric Ulcer and the Levels of GAS and EGF in Rats
 Abstract:ObjectiveTo discuss the therapeutic effect and mechanism of WWF on peptic ulcer(PU). MethodsTo observe the change of ulcer area and pH of gastric juice,and analyse the slice up of pathology by the optics microscope by the method of acetic acid-inducted gastric ulcer. Levels of GAS and EGF serum were determined by specific radioimmunoassay method.Results①The effect was significant when cured by WWF,especially in mid-dose group when observed under the optical microscope.②The change of pH of gastric juice was evident in model group compared with cured groups(P<0.05).③ The difference was significant (P<0.05) while compare the curative effect on ulcer areas in control group of WFF with that in cured groups, and the effect was the best in the mid-dose group (P<0.01). ④ The levels of GAS in serum were higher in cured groups of WFF than those in model group and control group. But the difference was not significant. ⑤The level of EGF in WWF groups decreased,mid-dose group had the best effect(P<0.01〕.ConclusionThere is evident therapeutic effect of WWF on PU. And it's mechanism is correlated to the defense of GAS and EGF.
Key words:WeiWeiFang; Peptic ulcer; EGF; GAS; Effect of ulcer healing
消化性溃疡病(peptic ulcer,PU)是临床常见多发病。 目前 H2受体拮抗剂及质子泵抑制剂在临床上的广泛 应用 ,使溃疡病的愈合率显著提高,但由于费用、副作用、耐药性、患者依从性等 问题 的存在,最终使该病的复发率仍居高不下。维胃方是经过临床应用的经验方, 对PU有较好的远期疗效。而胃泌素(GAS)和表皮生长因子(EGF)被认为是PU愈合过程中的防御因子,发挥着很重要的作用 [1,2]。因此,本实验通过观察维胃方对大鼠胃溃疡愈合情况及血清GAS,EGF水平的影响,探讨其治疗机理,为中医药治疗PU提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物SPF级Wistar雄性大鼠56只,180~220 g,由南方医科大学实验动物中心提供,粤检证字第2005A048号,质量检测单位:广东省实验动物监测所。
1.1.2 药物维胃方由茯苓、蒲公英、白及、三七组成,药材由南方医科大学附属南方 医院 中药房提供,经南方医科大学中医药学院药用植物与鉴定教研室鉴定。维胃方分高、中、低3个剂量组,常规煎煮取汁、浓缩、高压灭菌。雷尼替丁为山西太原药业有限公司生产,批号060501,国药准字H14022109。4℃冰箱保存备用。
1.1.3 试剂100%冰醋酸,广东省光华化学厂有限公司,批号20060325;表皮生长因子(EGF)试剂盒由北京北方生物技术 研究 所提供,批号061120;GAS试剂盒由解放军总医院放免所提供,批号064020。
1.1.4 仪器低速离心机LD5-2A型,北京医用离心机厂生产;光学显微镜,Olympus公司生产;LeicaRM2135切片机,德国Leica公司生产;SN-695B型放免测量仪,上海日环仪器一厂生产。
1.2 方法
1.2.1 造模方法乙酸诱导大鼠胃溃疡模型,参照Takagi等[3]的经典造模方法,并加以改进。大鼠禁食24 h,予10%水合氯醛腹腔注射麻醉,于剑突下纵向切开腹壁约2 cm,暴露胃体,并在胃前壁体窦交界处靠胃窦侧浆膜面,用100%乙酸浸泡过的Φ5 mm滤纸压贴60 s,然后将胃纳入体内,放回原位,逐层缝合,75%酒精消毒伤口。
1.2.2 剂量换算维胃方按照动物与人等效剂量折算,大鼠生药含量0.75 g/ml为中剂量,高剂量和低剂量分别为1.5 g/ml和0.375 g/ml;雷尼替丁水悬液浓度为0.003 g/ml。
1.2.3 动物分组及给药动物分为7组,每组8只:正常组、模型组、对照组、维胃方高剂量组、维胃方中剂量组、维胃方低剂量组、雷尼替丁组。正常组予每日正常饮食;模型组在造模3 d后处死;对照组观察自愈情况,在造模3 d后正常饮食,与用药组同时处死;其余各用药组均在造模3 d后予相应药物2 ml灌胃,灌胃7 d后处死。
1.2.4 标本采集和处理腹主动脉采血4 ml于真空管内,倾斜放置30 min后,放入低速离心机,以3 000 r/min,离心30 min,取上清2 ml,-20℃冷藏;剥离胃,结扎幽门,于十二指肠和食管处剪断取胃,由贲门挤胃液于pH试纸上检测;10%甲醛10 ml至贲门注入胃腔,结扎贲门,放入10%甲醛溶液固定30 min;沿胃大弯剪开胃,展平,冲洗胃内壁,用游标卡尺测量溃疡面的横径及纵径,溃疡面积(S)按公式S=π×d1×d2×1/4(π为圆周率取值3.14,d1,d2分别为溃疡面的最长径和最短径) 计算 ;以溃疡瘢痕平行于胃长轴方向的最长径为中心取材,10%甲醛固定,石蜡包埋,病理切片。
1.3 观察指标胃液pH值;溃疡面积计算;血清GAS,EGF含量;病理观察,并进行光学显微镜下分析。
1.4 统计学处理实验数据以±s表示,采用SPSS11.5软件进行One-way ANOVA的样本均数多重比较的F检验,P<0.05。
2 结果
2.1 大体标本观察
2.1.1 正常组胃黏膜光整完好,呈淡红色,无异常变化。
2.1.2 模型组大鼠腹腔可见胃肠胀气,浆膜面充血水肿,有组织粘连。胃窦和幽门处黏膜有多处溃疡点。
2.1.3 维胃方高、低剂量组浆膜表面均有粘连,造模痕迹明显;胃窦与胃体黏膜可见单个不规则溃疡点,其它无异常改变。中剂量组浆膜光滑,黏膜表面少见溃疡点或仅见小范围瘢痕增生。
2.1.4 雷尼替丁组浆膜面少许粘连,胃窦区黏膜表面粗糙,周围偶见充血或糜烂点。
2.1.5 自愈组浆膜表面粗糙、粘连,造模处凹陷明显,周围淤血,胃窦区黏膜溃疡愈合不全,可见暗红色瘢痕组织增生。




2.2 光学显微镜下观察
2.2.1 正常组胃上皮细胞及腺细胞形态和分布正常。黏膜层完整,腺体排列整齐,黏膜下层未见炎性细胞浸润及出血倾向,浆膜层完整。
2.2.2 模型组可见造模处黏膜缺损,偶及肌层,腺体完全破坏,有少量新生上皮细胞生成,黏膜下小动脉可见血栓闭锁性动脉内膜炎;非造模处炎性细胞浸润严重,黏膜下层可见渗血;浆膜层有纤维蛋白渗出,亦有较多炎性细胞浸润,部分标本有缺损。
2.2.3 对照组造模处黏膜缺损,偶及肌层,胃底腺轻度不典型性增生,再生腺细胞排列不整齐,黏膜下层炎性细胞浸润,并可见瘢痕纤维生成,部分小动脉血管内皮肿胀、增生,可见血栓或炎性栓塞;非造模处炎性细胞浸润;浆膜层有少量炎性细胞浸润,部分标本有缺损。
2.2.4 雷尼替丁组造模处可见被新生的胃上皮细胞和腺细胞覆盖,黏膜全层均有炎性浸润,但较模型组和对照组少,胃底腺轻度不典型性增生,黏膜下层有部分小动脉血管内皮肿胀、增生,可见少量血栓,浆膜层偶见炎性浸润。
2.2.5 维胃方组低、高剂量组与雷尼替丁组差别不大,其中高剂量组黏膜愈合情况相对较好,腺体细胞增生数量较多,黏膜下血管未见明显病理改变,但炎性细胞浸润仍较严重;中剂量组黏膜基本完整,胃上皮细胞与腺细胞形态及分布良好,腺体细胞增生数量较多,轻度不典型性增生,黏膜下层仅见少量炎性细胞浸润,黏膜下微循环未见明显病理改变,浆膜层完整,少量炎性细胞浸润。
2.3 溃疡面积 分析 各用药组与对照组(即观察造模后自愈情况)做比较,即可观察 治疗 效果,故作为空白对照的正常组以及模型组与各用药组不作比较。而对照组与各用药组间的比较都有统计学意义,其中以维胃方中剂量组最小,效果最显著(P<0.01)。结果见表1。表1 溃疡面积mm2(略)
2.4 维胃方对血清EGF,GAS及胃液pH值的 影响 结果显示:①对照组与维胃方中、高剂量组,模型组与维胃方中剂量组之间EGF值水平差异有意义,其中以维胃方中剂量组最低,差异最显著(P<0.01);②GAS各组均数符合方差齐性,但组间差异并无统计学意义;③模型组pH值和各用药组间的均数差异比较都有统计学意义(P<0.05)。结果见表2。表2 维胃方对血清EGF,GAS及胃液pH值的影响(略)
3 讨论
消化性溃疡,属中医“胃脘痛”“痞证”“吐酸”范畴。中医辨证寒热虚实夹杂,气血失和占大多数。气机阻滞,升降失调是其主要病机。维胃方是临床上用于治疗PU的经验方,方由茯苓、蒲公英、白及、三七组成。茯苓健脾补中;蒲公英清热消痈利湿;更兼白及、三七化淤止血、消痈敛疮、祛腐生肌。其中白及内含丰富的白及多胶糖,有很强的抗溃疡作用,对胃黏膜损伤具有明显的保护作用[4]。该方在临床上加减化裁,疗效显著。
PU的愈合是一个非常复杂的生理过程,包括细胞移行分化增殖和细胞外基质形成及新生血管生成等。胃酸分泌过多时,易破坏愈合环境,引起PU复发;另一方面,胃蛋白酶的最适合pH为1.8~3.5,乳蛋白经胃内少量胃蛋白酶作用就可以被消化。当泌酸不足时,会影响蛋白质的消化与吸收;同时随食物进入胃内的细菌也容易在体内生长和繁殖[5]。本实验中,模型组pH值显著高于用药组,这是由于模型组大鼠胃黏膜受到了严重的破坏,导致泌酸功能乏力;而经各用药组治疗后,溃疡愈合,胃黏膜被修复,泌酸功能逐渐恢复。这也与溃疡面积数据吻合:维胃方治疗组溃疡面积均小于对照组,其中以维胃方中剂量组效果最好(与各组比较均P<0.01)。胃黏膜病理组织镜下观察结果也与上述结论相符,尤以维胃方中剂量组效果最好。
GAS是与PU密切相关的胃肠肽类激素之一,它具有强大的刺激胃酸分泌效应。有实验证明[6],GAS起着刺激循环激素和神经递质的双重作用,能刺激胃酸分泌和营养胃黏膜,即促进胃肠道黏膜生长和刺激胃肠蛋白质,RNA,DNA合成及胃窦运动的作用[7]。而本实验结果显示,经维胃方治疗的大鼠血清GAS水平均高于模型组和对照组,但用药组和非用药组的血清GAS水平差异并无统计学意义。造成这种结果可能是由于造模后胃窦体处胃黏膜遭到破坏,H+逆向弥散进入黏膜使胃窦体处酸化,从而反馈抑制GAS释放,使血中GAS含量降低。而经维胃方治疗后,溃疡逐渐愈合,胃黏膜逐渐修复,GAS释放增加,从而GAS含量有所上升。但GAS又有刺激胃酸分泌和促进血流增加的双重作用,在溃疡愈合过程中,这两种不同的效果相互作用,达到一定的制衡。
EGF是一种具有广泛生物学效应的由唾液腺和十二指肠Brunner腺分泌的单链多肽,能够降低胃黏膜损伤程度,促进组织损伤修复 [8,9]。此外,EGF还可增加胃黏膜黏液黏蛋白的合成和分泌,有助于上皮组织的修复。有 研究 认为[10],在正常情况下,胃肠黏膜的完整性较好,所以血中EGF水平较低。而当胃肠黏膜存在炎症和溃疡时,受损的胃肠黏膜通透性增加,加之此时胃腔内EGF增加,便有较多的EGF进入血液循环,所以造模后血清EGF水平会上升。而本实验显示:经维胃方治疗的组别,血清EGF含量均较对照组下降,其中以维胃方中剂量组最为明显(P<0.01)。表明维胃方能改善溃疡愈合的条件,促进胃黏膜的修复,从而使血清的EGF含量维持在正常的水平。
本实验通过对维胃方在溃疡愈合过程中防御因子GAS和EGF的研究,证明维胃方对PU具有良好的治疗效果,其中以中剂量组最明显。在对PU愈合环境的检测过程中,与对照组相比pH值(P<0.05),溃疡面积、EGF水平(P<0.01),各指标的变化均与维胃方的治疗形成了量效依赖关系。但维胃方对溃疡愈合过程中攻击因子的具体作用机制及其在治疗过程中防御因子与攻击因子之间的相互制衡机制还有待进一步研究。
【 参考 文献 】
[1]刘 伟.EGF与胃肠关系的研究新进展[J].国外医学·消化系疾病分册,2002,22(4):207.
[2]Feng-Peng Sun, Yun-Gang, Han-Rong Qin. Alterations of gastric, somatosatin,G and D cell in rat gastric ulcer[J]. World Chin J Digestol,2004,12(2):363.
[3]TAKIK,OKABES,SAZIKIR.A new method for the production of chronic gastric ulcer in rats and the effect of several drugs on its healing[J].Jpn J Phartmacol,1969,19:418.
[4]耿志国.白及对盐酸引起的大鼠胃黏膜损伤的保护作用[J].中草药,1990,21(2):24.
[5]王继山,陈俭红.实用小儿胃肠病学[M].北京:北京医科大学 中国 协和医科大学联合出版社,1997:9.
[6]邱 桐,郑俊江,刘 喆,等.不同针刺手法对醋酸型胃溃疡大鼠溃疡指数及血清胃泌素水平的影响[J].天津中医学院学报,2001,20(4):27.
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