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凝结芽孢杆菌耐热乳糖酶基因的原核表达及酶学性质研究
 
     论文目录
 
摘要第4-5页
Abstract第5-6页
第一章 绪论第11-21页
    1.1 乳糖酶概述第11-14页
        1.1.1 乳糖酶的来源及性质第11-12页
        1.1.2 乳糖酶的应用第12-14页
            1.1.2.1 解决乳糖不耐症第12-13页
            1.1.2.2 生产低聚半乳糖第13页
            1.1.2.3 医学方面的应用第13-14页
            1.1.2.4 分析方面的应用第14页
    1.2 耐热乳糖酶第14-15页
        1.2.1 耐热乳糖酶概述第14页
        1.2.2 耐热乳糖酶的优势第14-15页
    1.3 基因工程技术与乳糖酶第15-17页
        1.3.1 基因工程技术第15-16页
        1.3.2 转基因乳糖酶的优势第16-17页
    1.4 耐热乳糖酶的研究进展第17-19页
        1.4.1 国外研究进展第17页
        1.4.2 国内研究进展第17-19页
    1.5 论文研究内容第19-21页
        1.5.1 论文研究背景第19-20页
            1.5.1.1 产耐热乳糖酶菌株的筛选第19-20页
            1.5.1.2 耐热乳糖酶基因在大肠杆菌中的表达第20页
        1.5.2 论文主要内容第20-21页
第二章 耐热乳糖酶基因原核表达及酶结构预测第21-28页
    2.1 方法第21-22页
        2.1.1 耐热乳糖酶基因的原核表达第21页
        2.1.2 重组菌耐热乳糖酶序列同源性比较第21页
        2.1.3 重组菌耐热乳糖酶结构预测第21-22页
            2.1.3.1 重组菌耐热乳糖酶一级结构分析第21-22页
            2.1.3.2 重组菌耐热乳糖酶二级结构分析第22页
            2.1.3.3 重组菌耐热乳糖酶三级结构分析第22页
    2.2 结果与讨论第22-27页
        2.2.1 耐热乳糖酶基因的原核表达第22-24页
        2.2.2 重组菌耐热乳糖酶序列同源性比较第24页
        2.2.3 重组菌耐热乳糖酶结构预测第24-27页
            2.2.3.1 重组菌耐热乳糖酶一级结构预测第24-25页
            2.2.3.2 重组菌耐热乳糖酶二级结构预测第25-26页
            2.2.3.3 重组菌耐热乳糖酶三级结构预测第26-27页
    2.3 小结第27-28页
第三章 重组菌产酶发酵条件及诱导条件的优化第28-41页
    3.1 材料与方法第28-33页
        3.1.1 材料第28-29页
            3.1.1.1 菌种及培养基第28页
            3.1.1.2 试剂第28-29页
            3.1.1.3 主要仪器与设备第29页
            3.1.1.4 主要试剂配制第29页
        3.1.2 方法第29-33页
            3.1.2.1 重组菌产酶粗酶液的制备第30页
            3.1.2.2 乳糖酶活力测定:ONPG法第30-31页
            3.1.2.3 重组菌产酶发酵条件的优化第31页
            3.1.2.4 重组菌产酶诱导条件的优化第31-33页
    3.2 结果与讨论第33-40页
        3.2.1 耐热乳糖酶酶活标准曲线的绘制第33页
        3.2.2 重组菌产酶发酵条件的优化第33-36页
            3.2.2.1 种龄第33-34页
            3.2.2.2 接种量第34-35页
            3.2.2.3 装液量第35-36页
            3.2.2.4 转速第36页
        3.2.3 重组菌产酶诱导条件的优化第36-40页
            3.2.3.1 E.coli BL21/pET32-gal T242生长曲线第36-37页
            3.2.3.2 诱导剂添加时间第37-38页
            3.2.3.3 诱导剂添加量第38-39页
            3.2.3.4 诱导时间第39页
            3.2.3.5 诱导温度第39-40页
    3.3 小结第40-41页
第四章 重组菌产耐热乳糖酶的分离纯化第41-51页
    4.1 材料与方法第41-46页
        4.1.1 材料第41-43页
            4.1.1.1 菌种及培养基第41-42页
            4.1.1.2 试剂第42页
            4.1.1.3 主要仪器与设备第42页
            4.1.1.4 主要试剂的配制第42-43页
        4.1.2 方法第43-46页
            4.1.2.1 蛋白含量测定:Folin-酚法第43-44页
            4.1.2.2 凝结芽孢杆菌T242耐热乳糖酶的分离纯化第44-45页
            4.1.2.3 重组菌耐热乳糖酶的分离纯化第45页
            4.1.2.4 重组菌耐热乳糖酶分子量的确定:SDS-PAGE电泳第45-46页
    4.2 结果与讨论第46-50页
        4.2.1 凝结芽孢杆菌耐热乳糖酶的分离纯化第46-47页
            4.2.1.1 DEAE-52离子交换层析分离耐热乳糖酶第46-47页
            4.2.1.2 Sephadex G-75分离纯化耐热乳糖酶第47页
        4.2.2 重组菌耐热乳糖酶的分离纯化第47-48页
        4.2.3 耐热乳糖酶分子量的确定第48-50页
    4.3 小结第50-51页
第五章 重组菌耐热乳糖酶酶学特性第51-59页
    5.1 材料与方法第51-54页
        5.1.1 材料第51-53页
            5.1.1.1 菌种及培养基第51页
            5.1.1.2 试剂第51-52页
            5.1.1.3 主要仪器与设备第52页
            5.1.1.4 主要试剂的配制第52-53页
        5.1.2 方法第53-54页
            5.1.2.1 耐热乳糖酶的最适温度及温度稳定性第53页
            5.1.2.2 耐热乳糖酶的最适pH及pH稳定性第53-54页
            5.1.2.3 金属离子对耐热乳糖酶活性的影响第54页
            5.1.2.4 耐热乳糖酶动力学常数的测定第54页
    5.2 结果与讨论第54-58页
        5.2.1 耐热乳糖酶的最适温度及温度稳定性第54-56页
        5.2.2 耐热乳糖酶的最适pH及pH稳定性第56-57页
        5.2.3 金属离子对耐热乳糖酶活性的影响第57-58页
        5.2.4 耐热乳糖酶动力学常数的测定第58页
    5.3 小结第58-59页
第六章 结论与展望第59-61页
    6.1 结论第59-60页
    6.2 展望第60-61页
参考文献第61-66页
致谢第66页

 
 
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