logo
教育论文中心  教育论文中心   广告服务  广告服务   论文搜索  论文搜索   论文发表  论文发表   会员专区  会员专区   在线购卡   在线购卡   服务帮助  服务帮助   联系我们  联系我们   网站地图  网站地图   硕士论文  会员专区   博士论文
当前位置:教育论文中心首页--西药学类毕业论文--冠心病并高同型半胱氨酸血症患者甲硫氨酸合成酶基因突变的研究
推荐论文
四种遗传性骨病基因诊断与产前诊
同型半胱氨酸竞争法ELISA检测
重组S-腺苷甲硫氨酸合成DS1
效液相色谱法测定血样中甲硫氨酸
血压合并同型半胱氨酸
宁夏回族甲硫氨酸基因A275
利用大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶去除
甲硫氨酸环境对胃癌化疗疗效
促转化法和微生物发酵法制备S-
超嗜热菌亮氨酰-tRNA合成
同型半胱氨酸与糖尿病肾病关系及
心血管疾病风险因子C-反应蛋白及
泛素水解22在同型半胱氨酸诱导
同型半胱氨酸与铜联合作用诱导心肌
 
站内搜索
 
 
科目列表
市场营销 管理理论 人力资源
电子商务 社会实践 先进教育
伦理道德 艺术理论 环境保护
农村研究 交通相关 烟草论文
电子电气 财务分析 融资决策
电影艺术 国学论文 材料工程
语文论文 数学论文 英语论文
政治论文 物理论文 化学论文
生物论文 美术论文 历史论文
地理论文 信息技术 班主任
音乐论文 体育论文 劳技论文
自然论文 德育管理 农村教育
素质教育 三个代表 旅游管理
国际贸易 哲学论文 工商管理
证券金融 社会学 审计论文
会计论文 建筑论文 电力论文
水利论文 园林景观 农林学
中医学 西医学 心理学
公安论文 法学法律 思想汇报
法律文书 总结报告 演讲稿
物业管理 经济学 论文指导
计算机 护理论文 社会调查
军事论文 化工论文 财政税收
保险论文 物流论文 语言教育
教育教学 给水排水 暖通论文
结构论文 综合类别 硕士论文
博士论文    
 
 
 
冠心病并高同型半胱氨酸血症患者甲硫氨酸合成酶基因突变的研究

【西药学类毕业论文】【摘要】 目的: 研究中国人冠心病并高同型半胱氨酸血症患者甲硫氨酸合成酶(MS)基因突变的情况。方法:应用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCRSSCP)以及DNA测序技术,检测60例患者MS基因中与结构和功能密切相关的10个外显子的点突变情况。结果:除已知的31外显子区3个SNP位点比较常见外,还发现了1个新的点突变,3869位为A/G杂合子(A→G的错义突变可使1195位氨基酸由异亮氨酸变为缬氨酸),此患者的血浆同型半胱氨酸血水平明显高于正常,为30.93 μmol·L-1。此外发现32内含子1个新的G/T多态性。结论:MS某种基因突变可能是影响MS酶功能及高同型半胱氨酸血症的原因之一。
【关键词】 高同型半胱氨酸血症 冠心病 甲硫氨酸合成酶 基因突变
甲硫氨酸合成酶(MS或MTR)是同型半胱氨酸代谢途径中的关键酶之一,可催化同型半胱氨酸再甲基化合成甲硫氨酸。高同型半胱氨酸血症与冠心病的发生发展可能有一定关系。为了研究中国人冠心病并高同型半胱氨酸血症患者MS基因突变的情况,我们应用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCRSSCP)以及DNA测序技术,检测了60例冠心病并高同型半胱氨酸血症患者MS基因中10个与结构和功能密切相关的外显子的点突变。
1 对象和方法
1.1 研究对象
选取我院住院的冠心病患者(根据临床表现、心电图或冠状动脉造影诊断)中空腹血浆同型半胱氨酸水平高于15 μmol·L-1者60例,实验发现新突变后再选取同型半胱氨酸水平正常者19例作为对照。
1.2 实验方法
1.2.1 基因组DNA的提取 采集外周静脉血,传统酚氯仿法提取基因组DNA 。
1.2.2 PCR反应 PCR扩增MS基因第18、19、20、21、22、23、29、30、31、32外显子,引物序列和扩增片段见表1,反应体系包括引物、MgCl2、dNTP、Taq酶、基因组DNA。
1.2.3 SSCP及测序分析 取PCR反应产物10 μl,95℃变性10 min,冰上骤冷,立即上样于6%~8%非变性聚丙烯酰胺凝胶,垂直电泳仪电泳6~10 h后凝胶银染,观察迁移带型。电泳显示异常带型的PCR反应产物,经纯化后进行测序分析,测序由北京三博远志生物技术有限公司完成。
2 结 果
60例冠心病并高同型半胱氨酸血症患者的MS基因10个外显子中,31外显子的PCR扩增片段显示出异常带型,分别进行测序,结果显示有3个已知的SNP位点,包括3778C/A、3782C/T、3862C/T,均为同义突变,此外发现了1个新的点突变,1例患者在31外显子区3869位为A/G杂合子(测序图见图1,以上位置为mRNA位置),A→G的错义突变可使1 195位氨基酸由异亮氨酸变为缬氨酸,此患者的血浆同型半胱氨酸血水平为30.93 μmol·L-1,明显高于正常,而在同型半胱氨酸水平正常者中未显示出同样的异常带型,测序也未发现此种突变,并且此例患者其它相关酶亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、胱硫醚缩合酶(CBS)也未检测出有意义的突变。32外显子的PCR扩增片段显示出1种异常带型,经测序分析发现为内含子G/T多态性,经核查为一个新的SNP位点,但对编码蛋白质没有影响,同型半胱氨酸水平正常者中也有此多态性。表1 MS基因中10个外显子的PCR引物序列及扩增片段长度
3 讨 论
研究发现高同型半胱氨酸血症与心脑血管疾病及某些先天畸形有一定关系。同型半胱氨酸是甲硫氨酸的中间代谢产物,其代谢有转巯基涉及胱硫醚缩合反应和再甲基化生成甲硫氨酸两种途径,前者需CBS催化,后者需MS催化,且在提供甲基的过程中需MTHFR的参与。高同型半胱氨酸血症是由于遗传和环境营养因素多方面造成的,同型半胱氨酸代谢途径中的关键酶基因突变是其发生的重要遗传因素之一,MS就是其中之一。MS cDNA于1996年克隆[1],此后研究发现MS基因编码区域有33个外显子和32个内含子,其中19至25外显子区与其编码的蛋白质β片状二级结构有关,并且为维生素B12即钴胺素辅基结合区域,26至33外显子区为编码的蛋白质活性区域,不同
图1 31外显子的测序图
的突变可能会对MS酶造成不同的影响[2]。研究较多的突变位点在P1173L、D919G,国内戴崇文等[3]研究未发现A2756G(D919G)与中国人心脑血管病的关系,但有研究发现此多态性与先天畸形发病如先天性心脏病有一定关系[4]。
我们选取了18、19、20、21、22、23、29、30、31、32外显子区,应用PCRSSCP及DNA测序技术,对60例中冠心病并高同型半胱氨酸血症患者进行研究,结果除发现已知的31外显子区3个SNP位点(无义突变)外,还发现了1个新的点突变,3869位(mRNA位置)为A/G杂合子,发生了A→G的错义突变(I1195V),此患者血浆同型半胱氨酸水平明显升高,而同型半胱氨酸水平正常者中未发现此种点突变,说明这是一个错义突变,并且此例患者其它相关酶MTHFR、CBS未检测出有意义的突变,因此发现的新突变与Hcy水平升高可能有关。本研究中没有检测出国外报道中常见的P1173L突变,检测到的已知的3个位点均为无义突变,没有临床意义,另外在32内含子发现了1个G/T多态性,因此MS基因变异在国内外人群可能有种族差异。本研究中新发现的错义突变可能与影响MS酶功能及高同型半胱氨酸血症的发生有关,但在人群中突变率如何及其临床意义尚有待大样本进一步研究。
【参考文献】
[1]LECLERC D,CAMPEAU E,GOYETTE P,et al.Human methionine synthase:cDNA cloing and identification of mutations in patients of the cb1G complementation group of folate/cobalamin disorders[J].Hum Mol Genetics,1996,5(12):18671874.
[2]WATLINS D,RU M,HWANG H Y,et al.Hyperhomocysteinemia due to methionine synthase deficiency,cb1G:structure of the MTR gene,genotype diversity,and recognition of a common mutation,P1173L[J].Am J Hum Genet,2002,71(1):143153.
[3]戴崇文,张广森.缺血性心、脑血管疾病患者同型半胱氨酸代谢相关酶基因突变频度的研究[J].中华血液学杂志,2001,22(9),484487.
[4]ZHU W L,CHENG J,DAO J J,et al.Polymorphism of methionine synthase gene in nuclear families of congenital heart disease[J].Biomed Environ Sci,2004,17(1):5764.

 
 
 
 您可能感兴趣的论文
论文标题页/字数分类
同型半胱氨酸与2型糖尿病关系及叶酸、VitB6、VitB12对糖尿病47页硕士论文
小麦S-腺苷甲硫氨酸代谢途径相关基因抗旱节水功能分析54页硕士论文
血浆同型半胱氨酸冠心病及其危险因素相关性研究46页硕士论文
同型半胱氨酸血症致动脉粥样硬化炎症机制研究77页博士论文
同型半胱氨酸诱发血管炎症致动脉粥样硬化机制研究53页硕士论文
南中国海大亚湾地区海岛渔民血压及冠脉病变特征和危险因素分析122页博士论文
代谢工程改造谷氨酸棒杆菌生产S-腺苷甲硫氨酸86页博士论文
同型半胱氨酸及其代谢基因多态性与糖尿病肾病关系51页硕士论文
亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T和A1298C多态性与血浆同型半胱氨61页硕士论文
变铅青链霉菌和硝吡咯假单胞菌中次级代谢启动研究86页博士论文
一株产同型半胱氨酸菌株分离及产条件研究57页硕士论文
同型半胱氨酸及MTHFR基因与缺血性脑血管病关系研究69页硕士论文
同型半胱氨酸对糖尿病周围神经病影响44页硕士论文
大理地区同型半胱氨酸水平与颈动脉硬化关系28页硕士论文
阿托伐他汀、福辛普利对同型半胱氨酸干预研究42页硕士论文
男性健康体检者血清同型半胱氨酸水平与肾功能损伤关系56页硕士论文
同型半胱氨酸与慢性肾脏病患者心脑血管疾病关系研究118页博士论文
同型半胱氨酸与动脉粥样硬化性脑血栓形成患者发病严重程度及远期预后相关59页硕士论文
武威市农村血压人群流行病学特征及维生素C干预研究110页硕士论文
盐胁迫及甜菜碱、牛磺酸干预对同型半胱氨酸代谢影响76页硕士论文
同型半胱氨酸抑制血管再生机制研究104页博士论文
同型半胱氨酸对血管内皮功能损伤实验研究及复方丹参滴丸对内皮功能78页硕士论文
同型半胱氨酸与脑卒中关系及联免疫(STE)法检测血浆Hcy应用研45页硕士论文
甲硫氨酸合成(MS)基因A2756G多态性与2型糖尿病大血管并发症46页硕士论文
转SsBHMT基因拟南芥抗逆性评价和玉米S-腺苷甲硫氨酸合成基因62页硕士论文
小麦抗旱指标筛选与S-腺苷甲硫氨酸合成基因克隆和功能分析77页硕士论文
Hcy及其代谢关键基因多态性与河南汉族脑梗死相关性研究98页博士论文
 
 
| 会员专区 | 在线购卡 | 广告服务 | 网站地图 |
版权所有 教育论文中心 Copyright(C) All Rights Reserved
联系方式: QQ:277865656 或写信给我