| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-14页 |
| Summary | 第14-19页 |
| 第一篇 dsRNA介导的烟草抗病毒基因工程研究 | 第19-93页 |
| 第一章 RNA沉默与植物抗病毒特性 | 第19-42页 |
| 1 引言 | 第19页 |
| 2 RNA沉默在生物界存在的普遍性 | 第19-21页 |
| 2．1 转基因植物的共抑制 | 第19-20页 |
| 2．2 RNA介导的抗病毒特性 | 第20页 |
| 2．3 真菌中的消除作用 | 第20页 |
| 2．4 物中的RNA干扰 | 第20-21页 |
| 3 RNA沉默的机制 | 第21-25页 |
| 3．1 RNA阈值模型（RNA threshold model） | 第21-22页 |
| 3．2 异常RNA （Aberrant RNA,aRNA）模型 | 第22页 |
| 3．3 双链RNA模型 | 第22-25页 |
| 4 参与RNA沉默的相关酶及其编码基因 | 第25-26页 |
| 5 RNA沉默的信号传导 | 第26-32页 |
| 5．1 可移动沉默信号存在的证据 | 第26页 |
| 5．2 信号传导的特征 | 第26-27页 |
| 5．3 RNA沉默传导的可能信号分子 | 第27-30页 |
| 5．4 病毒抑制子与可移动信号 | 第30-32页 |
| 6 RNA沉默是植物自然的抗病毒机制 | 第32页 |
| 7 RNA沉默的病毒抑制子 | 第32-42页 |
| 7．1 RNA沉默抑制子的分析方法 | 第34页 |
| 7．2 RNA沉默抑制子的抑制机制 | 第34-40页 |
| 7．3 植物钙调素相关蛋白（RGS-CAM）对RNA沉默的抑制 | 第40页 |
| 7．4 病毒抑制子与其它防御途径的相互作用 | 第40-41页 |
| 7．5 病毒抑制子的应用前景 | 第41-42页 |
| 第二章 研究目的意义、主要内容和技术路线 | 第42-46页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第42-44页 |
| 2 主要研究内容 | 第44-45页 |
| 3 本研究的技术路线 | 第45-46页 |
| 第三章 黄瓜花叶病毒部分复制酶基因和番茄花叶病毒移动蛋白基因反向重复植物表达载体的构建 | 第46-63页 |
| 1 材料 | 第46页 |
| 1．1 菌种、质粒 | 第46页 |
| 1．2 酶、化学试剂 | 第46页 |
| 1．3 抗生素 | 第46页 |
| 1．4 常用试剂的配制 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-55页 |
| 2．1 DNA分子操作常规技术 | 第46-51页 |
| 2．2 反向重复植物表达载体构建 | 第51-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-60页 |
| 3．1 △Rep基因的克隆和和反向重复植物表达载体的构建 | 第55-58页 |
| 3．1．1 △Rep基因的获得 | 第55-56页 |
| 3．1．2 △Rep基因的反向重复植物表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 3．2 MP基因克隆和和反向重复植物表达载体的构建 | 第58-60页 |
| 3．2．1 MP基因的获得 | 第58页 |
| 3．2．2 MP基因的反向重复植物表达载体的构建 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 4．1 内含子的使用和选择 | 第60页 |
| 4．2 反向重复植物表达载体构建策略 | 第60-61页 |
| 4．3 dsRNA介导的抗性的应用 | 第61-63页 |
| 第四章 瞬时表达CMV部分复制酶基因和ToMV移动蛋白基因Hairpin能阻止相关病毒的侵染 | 第63-69页 |
| 1 材料 | 第63-64页 |
| 1．1 供试植物 | 第63-64页 |
| 1．2 供试质粒 | 第64页 |
| 1．3 毒源 | 第64页 |
| 1．4 抗血清 | 第64页 |
| 2 方法 | 第64-65页 |
| 2．1 农杆菌浸润法（Agroinfiltration） | 第64页 |
| 2．2 病毒接种 | 第64-65页 |
| 2．3 ELISA测定 | 第65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-67页 |
| 3．1 瞬时表达CMV △Rep hairpin RNA对相关植物病毒侵染产生干涉 | 第65页 |
| 3．2 瞬时表达ToMV MP hairpin RNA对相关植物病毒侵染产生干涉 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 反向重复△Rep和MP基因在烟草中的表达及其对相关病毒的抗病性分析 | 第69-93页 |
| 1 材料 | 第69-70页 |
| 1．1 转化的受体植物 | 第69页 |
| 1．2 菌株与质粒 | 第69页 |
| 1．3 培养基与抗生素 | 第69页 |
| 1．4 供抗性测试的植物 | 第69页 |
| 1．5 供试毒源 | 第69页 |
| 1．6 抗血清 | 第69-70页 |
| 2 方法 | 第70-78页 |
| 2．1 烟草叶片感染与卡那霉素抗性植株的再生 | 第70-71页 |
| 2．2 转基因植株的抗病性分析 | 第71-72页 |
| 2．3 转基因烟草的分子生物学鉴定 | 第72-78页 |
| 3 结果与分析 | 第78-91页 |
| 3．1 反向重复△Rep基因和MP基因的烟草转化和卡那抗性植株的获得 | 第78页 |
| 3．2 转基因植株对相关病毒的抗性分析 | 第78-87页 |
| 3．3 转反向重复△Rep基因和MP基因烟草植株的分子生物学检测 | 第87-91页 |
| 4 讨论 | 第91-93页 |
| 第二篇 导入病毒基因的转基因烟草的重组风险评估 | 第93-110页 |
| 第六章 抗病毒转基因植物释放的风险评估研究进展 | 第93-103页 |
| 1 抗性机制 | 第94-95页 |
| 2 抗病毒转基因植物潜在风险 | 第95-101页 |
| 2．1 表型效应所引起的潜在风险 | 第95-97页 |
| 2．2 遗传效应引起的潜在风险 | 第97-101页 |
| 3 抗性下降引发的新争论 | 第101页 |
| 4 问题和讨论 | 第101-103页 |
| 第七章 导入病毒基因的转基因烟草的重组风险分析 | 第103-110页 |
| 1 材料与方法 | 第103-105页 |
| 1．1 毒源 | 第103页 |
| 1．2 供试植物 | 第103-104页 |
| 1．3 抗血清 | 第104页 |
| 1．4 转基因烟草的扩繁及接种 | 第104页 |
| 1．5 间接ELISA | 第104页 |
| 1．6 免疫捕获反转录PCR （IC-RT-PCR） | 第104-105页 |
| 2 结果与分析 | 第105-108页 |
| 2．1 转CMV-P1部分复制酶基因烟草的重组风险分析 | 第105-107页 |
| 2．2 转ToMV MP基因烟草的重组风险分析 | 第107-108页 |
| 3 讨论 | 第108-110页 |
| 全文小结 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-123页 |
| 附录A 本论文所用重要缩写词及中文对照 | 第123-124页 |
| 附录B 常用缓冲液及培养基配方 | 第124-130页 |
| 附录C 常用的抗生素及使用浓度 | 第130-131页 |
| 附录D 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第131-132页 |
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