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复方蜥蜴散对慢性萎缩性胃炎模型大鼠肿瘤坏死因子-α及胃黏膜病

【西医学学生暑期实践论文】作者:张静霜,朱西杰,朱微微,陈健茂,吴璟,李卫强 【摘要】 目的观察复方蜥蜴散对慢性萎缩性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis,CAG)模型大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及胃黏膜病理形态学的影响,探讨其治疗CAG的作用机制。方法将90只SD雄性大鼠随机分为正常组,
作者:张静霜,朱西杰,朱微微,陈健茂,吴璟,李卫强
【摘要】 目的观察复方蜥蜴散对慢性萎缩性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis,CAG)模型大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及胃黏膜病理形态学的影响,探讨其治疗CAG的作用机制。方法将90只SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,复方蜥蜴散大、中、小剂量组及维酶素组,除正常组以外,均采取55℃热盐水、2%水杨酸、20 mmol/L脱氧胆酸钠3个致萎缩因素配合饥饱失常造成CAG模型大鼠,分别运用复方蜥蜴散大、中、小剂量及维酶素治疗,观察各组大鼠血清TNF-α的含量及胃黏膜的病理学形态。结果蜥蜴散大、中、小剂量组血清中TNF-α含量显著低于模型组(P<0.01),蜥蜴散大、中剂量组血清中TNF-α含量显著低于维酶素组(P<0.05)。各组胃黏膜组织形态学观察,复方蜥蜴散组较模型组及维酶素组有明显改善。结论复方蜥蜴散可以使CAG模型大鼠血清中TNF-α含量降低,能够明显改善CAG模型大鼠胃黏膜的炎症、萎缩性病变,对CAG模型大鼠有明显的治疗作用。
【关键词】 慢性萎缩性胃炎 复方蜥蜴散 肿瘤坏死因子-α 病理组织学
Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of compound lizards powder(TCLP) ,a compound Chinese medicine ,on the tumor necrosis factor-α(TNF-α), and gastric mucosa pathological change in rat model of Chronic Atrophic Gastritis(CAG). and the mechanisms.MethodsNinety male SD rats were randomly divided into six groups:the normal control group,the model group,the Vitacoenzyme control group,the low-dose,middle-dose and high-dose TCLP groups. Except normal control group, other groups took 55℃ hot water which contained 150g/L NaCl,2% Salieylas and 20mmol/L sodium deoxyeholate,combined with overeating and hungering.All rats were treated with different medicines,after a month the rats were sacrificed,and their gastric mucosa and serum were collected to detect the serum level of TNF-α and observe the histology mucosa changes by microscope.ResultsCompared with model group,the serum level of TNF-α in the rats of all TCLP groups was significantly lowered(P<0.01). Compared with Vitacoenzyme control group the serum level of TNF-α in the rats of middle-dose and high-dose TCLP groups was significantly lowered(P<0.05), and the pathological changes were significant. ConclusionTCLP can significantly adjust level of TNF-α,and has protective function against the gastric mucosal injury.
Key words: Chronic Atrophic Gastritis (CAG); The compound lizards powder; Tumor Putrescence Factor (TNF); Pathological histology
慢性萎缩性胃炎(Chronic Atrophic Gastritis,CAG)是消化系统的常见病,其以胃黏膜变薄、固有腺体萎缩或伴有肠化、异型增生为主要病理改变。CAG与胃息肉同时存在或肠化生合并中度或高度不典型增生时可发生癌变,张玲霞等[1]对CAG患者10~20年的随访发现,有5%~10%的患者发生了胃癌,WHO将其列为胃癌前期状态。本课题以朱西杰教授治疗CAG疗效确切的临床验方复方蜥蜴散(the compound Lizards Powder,TCLP;以下简称蜥蜴散),来观察其对CAG模型大鼠肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)及胃黏膜病理组织学的影响,探讨其对CAG的治疗机理,为临床治疗提供依据。
1 材料与仪器
1.1 动物清洁级SD雄性大鼠90只,鼠龄8周,体质量(180±20)g;标准颗粒饲料,均由宁夏医科大学实验动物中心提供,合格证号sc-xk(宁)2005-001。
1.2 药物及试剂蜥蜴散:由蜥蜴粉、鹿角霜粉、海螵蛸粉、炒白术粉、半枝莲粉等组成,由宁夏医科大学中医消化病研究所提供。维酶素:0.2 g/片,新乡恒久远药业有限公司生产,批号20080311;脱氧胆酸钠:北京市海淀区微生物培养基制品厂生产(含量>95%),批号: 080716;氯化钠:天津市福晨化学试剂厂生产(含量≥99.5%),批号:20080624;水杨酸:天津市福晨化学试剂厂生产(含量≥99.5%),批号:20080427;肿瘤坏死因子放射免疫分析药盒:北京科美东雅生物技术有限公司出品,批号:S20063093。
1.3 仪器与设备数显恒温水浴箱:北京长源实验设备厂生产。电子天平AL104:梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司生产;TD5A-WS台式离心机:长沙湘仪离心仪器有限公司出品。
2 方法
2.1 药物配制①脱氧胆酸钠溶液:用生理盐水配成20 mmol/L的脱氧胆酸钠溶液(pH值7~7.8)。②氯化钠溶液:用双蒸水配成150 g/L的氯化钠溶液,临用时加热至55℃;用双蒸水配成0.9%的氯化钠溶液。③水杨酸溶液:用生理盐水配成浓度为2%的水杨酸溶液。④维酶素混悬液: 维酶素片研末,用生理盐水配成0.1/m1的混悬液。⑤蜥蜴散糊剂:蜥蜴散经过粉碎、高温灭菌、蒸2h,晾干后,用双蒸水分别配成0.28,0.14,0.07 g/ml糊剂混悬液装瓶,4℃冰箱保存备用。
2.2 动物分组将90只SD雄性大鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、维酶素组(C组)、蜥蜴散大剂量组(D组)、蜥蜴散中剂量组(E组)、蜥蜴散小剂量组(F组)6组,每组15只,除A组外,其余大鼠均给予造模处理。
2.3 动物模型的建立及处理措施
2.3.1 CAG模型的建立参阅大量的文献资料[2~6],结合中西医理论,具体的造模方法为∶配制浓度为150 g/L盐水,加热到55℃,10 ml/kg·d,灌胃,1次/d;2%水杨酸溶液10 ml/kg·d,灌胃,1次/d;20 mmol/L脱氧胆酸钠溶液,自由饮用;同时配以饥饱失常处理,即2 d饱食,ld禁食。B~F组按上述造模方法造模90 d,A组大鼠充足供应标准颗粒饲料及清洁自来水。
2.3.2 处理措施分别在造模第30天、60天、90天各组处死1只大鼠,取胃黏膜做病检以证实造模成功后, A组大鼠仍然充足供食及饮清洁自来水,B~F组大鼠则停止造模,A组与 B组大鼠开始给予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃,1次/d;C组大鼠给予0.1/ml维酶素混悬液10 ml/(kg·d)灌胃,1次/ d;D组、E组、F组大鼠分别给予蜥蜴散大剂量(20 g/kg·d)、中剂量(10 g/kg·d)、小剂量(5 g/kg·d)灌胃,1次/d;连续用药1个月(蜥蜴散中剂量按照正常人剂量换算而来,大剂量加倍,小剂量减半)。
2.4 标本采集和处理至预定阶段,大鼠禁食24 h后,全部用l0%水合氯醛溶液腹腔内注射麻醉大鼠,心脏取血5 ml置于无菌试管,待测。剖腹,距贲门和幽门1.5 cm离断取出全胃并处死。沿胃大弯侧剖开,冰生理盐水冲洗后,滤纸吸干铺开。胃黏膜标本固定于10%的中性福尔马林溶液中,固定48 h后剪成约2 mm的条状物,石蜡包埋,常规切片,HE染色,观察病理组织学改变。
2.5 用放射免疫法测定血清TNF-α取血2 ml,在4℃,4 000 r/min条件下离心10 min,取上清液,零下 20℃冻存。测定方法采用固相放射免疫检测严格按说明书操作,在曲线上查得的待测样品的含量,以ng/ml表示。
2.6 统计学处理TNF-α数据采用±s表示,数据采用SPSS 11.5统计软件处理。
3 结果
3.1 CAG大鼠血清TNF-α检测结果各治疗组与模型组比较(P<0.01)说明各治疗组对CAG均有显著疗效,蜥蜴散大、中剂量组与维酶素组比较P<0.05,说明蜥蜴散大、中剂量组治疗效果显著优于维酶素组;蜥蜴散小剂量组与维酶素组比较P>0.05说明治疗效果无明显差别,考虑为剂量过小引起。蜥蜴散大、小剂量组之间比较(P<0 .05),蜥蜴散中、小剂量组之间比较(P<0.05),说明蜥蜴散大、中剂量组疗效优于小剂量组。结果见表1。表1 不同治疗组血清TNFα的含量(略)
3.2 胃黏膜病理组织学结果光镜观察(见图1~6)。结果说明:黏膜上皮完整,固有黏膜密集排列的腺体,散在淋巴细胞,未见胃黏膜萎缩(图1)。大鼠胃黏膜显示慢 性炎,黏膜腺萎缩,固有层淋巴细胞灶性侵润,淋巴滤泡形成
3.2 胃黏膜病理组织学结果光镜观察(见图1~6)。结果说明:黏膜上皮完整,固有黏膜密集排列的腺体,散在淋巴细胞,未见胃黏膜萎缩(图1)。大鼠胃黏膜显示慢 性炎,黏膜腺萎缩,固有层淋巴细胞灶性侵润,淋巴滤泡形成,黏膜基层增厚(图2)。可见大鼠黏膜固有腺体轻度萎缩,淋巴细胞、浆细胞弥漫性浸润,小血管扩张充血纤维组织增生,黏膜下肌层增厚(图3)。大鼠胃黏膜可见淋巴细胞、浆细胞散在浸润(图4)。大鼠胃黏膜可见固有层淋巴细胞灶性浸润,小血管扩张充血(图5)。在鼠黏膜组织呈慢 性炎症,黏膜固有层可见多量淋巴细胞、浆细胞及少量中性粒细胞浸润,黏膜下基层增厚(图6)。
4 讨论
本实验以20 mmol/L的脱氧胆酸钠模拟胆汁反流,用2%水杨酸钠损伤胃黏膜,并用浓度为150 g/L,55℃热盐水模拟人类高盐饮食以及过热饮食对胃黏膜的损害,同时配合饥饱失常对胃黏膜进行损害,建立大鼠CAG模型。病理检查发现大鼠胃腺体数目和厚度降低,固有膜中各种炎症细胞浸润(主要是淋巴细胞和浆细胞),黏膜肌层增厚,部分大鼠出现肠化。其病理形态符合CAG的临床表现,说明实验动物模型复制成功。
TNF-α是特异性免疫应答与炎症反应之间的一种重要介质,在炎症的发生、发展过程起重要作用,是炎症趋化因子和激活因子 [7]。适量的TNF-α可参与免疫细胞的活化炎症反应,具有抗感染、抗病毒和抗肿瘤作用;而过量的TNF-α则增强微血管壁通透性,改变黏膜血管内皮细胞反应性,致微血管内凝血,导致细胞破坏,溶酶体漏出,炎性介质释放,使黏膜营养不良。同时,还可以趋化中性粒细胞,增强其吞噬杀伤能力,增强炎症局部淋巴细胞浸润和增殖,从而诱发了一系列的炎症改变,加重黏膜炎症反应。尤其是在中、重度萎缩性胃炎的病理改变中可能存在着TNF-α所致的免疫损伤。其在体内的表达也影响肿瘤的发生、发展。
CAG属中医学“胃脘痛”“胃痞”等范畴,中医认为CAG多由浊毒瘀阻胃络,导致黏膜失润,胃液减少,腺体萎缩,黏膜变苍灰色。笔者认为:蜥蜴散对CAG的治疗机制可能有:①抑制TNF-α的特异性免疫应答,阻止抗原产生不适当应答所造成组织损伤或器官功能障碍,即阻止其产生超敏反应。通过朱西杰教授多年临床观察复方蜥蜴散具有脱敏作用[8]。②修复受损黏膜,蜥蜴生活在沙漠之中,能适应恶劣的自然环境,而且遇敌常断其尾以逃生,不久尾巴可自行重生,说明蜥蜴对组织损伤有再生和修复功能。另再配以质地较粘的中药或矿物质,配成细粉, 可使其粘附于胃黏膜表面,充分发挥药力,促进局部血液循坏,改善组织营养,减少炎症渗出,促进炎症吸收、减少上皮细胞增生,更有利于黏膜修复、病理改变的逆转[9~11]。通过病理组织学观察,蜥蜴散大剂量组黏膜修复作用显著高于维酶素组,说明蜥蜴散对CAG大鼠胃黏膜细胞的过度增殖有抑制作用,并部分逆转萎缩胃黏膜的病理组织学的变化。③改善微血管内凝血,减少炎症细胞的释放,改善黏膜营养不良的状况。复方蜥蜴散以蜥蜴科的动物丽斑麻蜥的全体(Eremias argus peters)为主药,配合鹿角霜粉、海螵蛸粉、炒白术粉、半枝莲等以活血化瘀为主。研究发现,蜥蜴散大、中、小剂量组血清中TNF-α含量显著低于模型组(P<0.01),蜥蜴散大、中剂量组血清中TNF-α含量显著低于维霉素组(P<0.05),表明蜥蜴具有脱敏,活血化瘀功能,能改善TNF-α水平升高引起的微血管内凝血,从而改善粘膜营养不良的状况,同时抑制TNF-α的释放,并阻止其激活中性粒产生多种炎症介质,减少组织的损伤和炎症,对萎缩的胃黏膜有很好的修复作用,对胃黏膜组织的保护具有积极的意义。但由于中药复方成分复杂,对其作用机制还要从多环节进一步研究。
【参考文献】
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