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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--香蕉果实特异表达cDNA及果实特异表达启动子的分离鉴定
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香蕉果实特异表达cDNA及果实特异表达启动子的分离鉴定
 
     论文目录
 
1 前言第1-40页
   ·香蕉的特性及经济意义第14页
   ·香蕉果实采后生理学研究进展第14-15页
   ·香蕉果实分子生物学研究进展第15-22页
     ·分离香蕉采后果实乙烯生物合成相关的基因第16页
     ·采用差异筛选方法分离果实成熟相关基因第16-18页
     ·采用分离蛋白质方法克隆果实成熟相关基因第18-19页
     ·其它重要果实成熟相关基因的分离与表达研究第19-20页
     ·淀粉酶生理及分子生物学研究进展第20-22页
   ·基因芯片(gene chip)技术第22-25页
     ·基因芯片原理第22页
     ·基因芯片分类第22-23页
     ·芯片在植物功能基因组学研究中的应用第23-25页
       ·利用芯片技术研究植物基因的结构第23页
       ·利用芯片技术研究基因表达与发育生物学第23页
       ·利用芯片技术研究基因的表达水平,建立基因表达谱第23-24页
       ·利用基因芯片技术筛选抗性基因第24页
       ·利用基因芯片技术研究基因突变及多态性分析第24-25页
       ·利用芯片技术鉴定重要的目的基因第25页
   ·抑制差减杂交技术第25-29页
     ·SSH技术路线第26-27页
     ·SSH的特点第27-28页
     ·SSH在植物功能基因组学研究上的应用第28-29页
   ·植物启动子研究进展第29-37页
     ·高等植物启动子的结构第29-30页
       ·转录起始位点第29页
       ·TATA盒、CAAT盒与GC结构第29-30页
       ·增强子和沉默子第30页
     ·启动子的类型第30-35页
       ·组成型启动子第30-31页
       ·组织特异性启动子第31-32页
       ·诱导型启动子第32-35页
     ·香蕉启动子分离及应用概况第35-37页
   ·本论文研究的目的意义第37-40页
2 微阵列筛选香蕉果实特异表达cDNA片段第40-50页
   ·材料与试剂第40页
     ·植物材料第40页
     ·试剂第40页
     ·质粒及菌种第40页
     ·抑制缩减文库构建第40页
   ·微阵列制作方法第40-44页
     ·SSH文库阳性质粒提取第40-41页
     ·SSH文库中重组克隆的鉴定第41页
     ·cDNA芯片制备第41-42页
       ·将鉴定出的重组质粒的插入片段进行PCR扩增第41页
       ·扩增的PCR产物纯化第41页
       ·点样第41-42页
     ·对样品的RNA进行标记第42-44页
       ·香蕉果实和根、茎叶的总RNA的提取第42-43页
       ·对样品的RNA进行标记第43-44页
     ·杂交与清洗第44页
     ·芯片扫描第44页
     ·芯片图像的采集与数据分析第44页
     ·芯片图像的采集与数据分析第44页
   ·结果第44-48页
     ·对阳性重组质粒进行PCR扩增第44页
     ·芯片分析结果第44-46页
     ·cDNA序列测定与BLAST分析第46-48页
     ·cDNA的功能分类第48页
   ·讨论第48-50页
     ·关于确定光吸收值的比例问题第48页
     ·关于未知功能和一些同源性比较低的cDNA片段第48-49页
     ·不同实验方法对分离低丰度基因的影响第49-50页
3 果实特异表达基因cDNA Northern blot分析第50-53页
   ·材料与试剂第50页
   ·方法第50-52页
     ·RNA提取第50页
     ·杂交探针标记第50页
       ·随机挑选cDNA克隆第50页
       ·标记反应第50页
     ·杂交第50-52页
       ·转膜第50-51页
       ·Northern杂交第51-52页
   ·结果与讨论第52-53页
     ·cDNA表达的器官特异性第52页
     ·cDNA表达量的差异第52页
     ·Northern blot分析和芯片分析结果的一致性第52-53页
4 香蕉果实a-1,4葡聚糖磷酸化酶基因克隆第53-64页
   ·材料与试剂第53页
   ·方法第53-58页
     ·香蕉果实RNA提取第53页
     ·香蕉果实第一链cDNA合成第53-54页
     ·RACE引物设计第54页
     ·RACE扩增BR63的5′端和3′端第54-55页
       ·Master Mix的准备(CLOTECH's Advantage 2 Polymerase Mix)第54页
       ·5′RACE反应体系第54-55页
       ·3′RACE反应体系第55页
       ·PCR程序第55页
     ·RACE产物的克隆及重组子筛选第55-58页
       ·回收5′、3′RACE特异性条带第55-56页
       ·回收PCR产物连接第56页
       ·连接产物转化E.coli DH5α第56-57页
       ·重组质粒DNA的微量提取第57页
       ·质粒DNA的大量提取第57-58页
       ·重组质粒酶切鉴定及测序第58页
   ·结果与讨论第58-64页
     ·基因克隆及测序第58-60页
       ·BR63片段5′、3′RACE扩增结果第58-59页
       ·序列测定第59-60页
     ·基因结构分析第60-62页
     ·基因同源性比较第62-63页
     ·利用RACE技术成功克隆到BR63的全长序列第63页
     ·不同方法克隆3′RACE扩增比较第63-64页
5 a-1,4葡聚糖磷酸化酶基因在香蕉果实成熟过程中的表达第64-73页
   ·材料与试剂第64页
   ·方法第64-66页
     ·采后香蕉果实乙烯释放量及呼吸强度测定第64-65页
       ·材料处理第64-65页
     ·RT-PCR分析采后不同成熟阶段a-1,4葡聚糖磷酸化酶基因表达第65-66页
       ·RNA提取第65页
       ·cDNA第一连合成第65页
       ·RT-PCR反应第65-66页
       ·RT-PCR产物分析第66页
   ·结果第66-71页
     ·呼吸强度变化第66页
     ·乙烯释放量的变化第66页
     ·a-1,4葡聚糖磷酸化酶基因表达半定量PCR(RT-PCR)分析第66-69页
     ·The Scion Image软件分析表达结果第69-71页
   ·讨论第71-73页
     ·a-1,4葡聚糖磷酸化酶基因表达量与香蕉果实采后呼吸、乙烯变化的关系第71页
     ·a-1,4葡聚糖磷酸化酶基因在果实采后成熟过程中的表达第71页
     ·关于基因表达的半定量方法第71-73页
6 香蕉果实特异表达启动子克隆第73-80页
   ·材料与试剂第73页
     ·植物材料第73页
     ·试剂第73页
     ·质粒及菌种第73页
   ·方法第73-76页
     ·香蕉凝集素(Banana Lectin,BanLec)基因表达研究第73页
     ·BanLec基因启动子的克隆第73-76页
       ·香蕉基因组DNA提取第73-74页
       ·香蕉基因组DNA酶切消化第74页
       ·酶切产物纯化第74页
       ·纯化后基因组DNA与GenomeWalker Adaptors连接第74-75页
       ·以GenomeWalker Libraries为模板的PCR第75-76页
       ·PCR产物回收第76页
       ·回收PCR产物连接和转化第76页
       ·重组质粒酶切鉴定及测序第76页
   ·结果第76-79页
     ·DNA提取及内切酶消化第76页
     ·启动子片断扩增及测序第76-78页
     ·启动子序列分析第78-79页
   ·讨论第79-80页
     ·克隆到的启动子序列的长度第79页
     ·启动子序列分析第79-80页
7 凝集素基因启动子植物表达载体(pBIL2和pBIB2)的构建第80-88页
   ·材料与试剂第80页
   ·方法第80-85页
     ·植物表达载体pBIL2构建第80-82页
       ·BanLec基因启动子序列(命名为BL2)PCR扩增第80-82页
     ·植物表达载体pBIB2构建第82-85页
       ·芪合酶(命名为LAB)基因PCR扩增第82-84页
       ·LAB PCR产物回收、测序第84页
       ·LAB PCR回收产物及pBIL2表达载体BamH1、Sac1双酶切第84页
       ·回收酶切目的基因及载体片段第84页
       ·pBIB2载体连接第84页
       ·pBIB2载体转化大肠杆菌DH5α第84页
       ·质粒DNA微量提取及重组子的酶切鉴定第84-85页
   ·结果第85-88页
     ·BanLec基因启动子植物表达载体pBIL2的构建第85页
     ·芪合酶基因(LAB)克隆及测序第85-86页
     ·Banlec基因启动子连接芪合酶基因(LAB)表达载体pBIB2构建第86-88页
8 凝集素基因启动子瞬时表达活性检测第88-94页
   ·材料与试剂第88页
   ·设备第88页
   ·方法第88-91页
     ·香蕉转化材料的准备第88页
     ·基因枪转化第88-89页
       ·质粒PBI121、pBIL2的大量提取第88页
       ·微弹制备(王关林等,2002)第88-89页
       ·基因枪轰击香蕉材料第89页
     ·GUS组织化学染色第89页
     ·GUS活性检测第89-91页
       ·GUS提取液的制备第89-90页
       ·GUS提取液蛋白含量测定第90-91页
       ·酶反应第91页
   ·结果与讨论第91-94页
     ·pBIL2载体在香蕉不同组织中瞬时表达结果第91页
     ·pBI121与pBIL2载体GUS活性检测第91-94页
       ·GUS提取液蛋白含量第91页
       ·转化24小时后一定时间内GUS酶活力变化第91-94页
9 果实特异表达启动子启动芪合酶基因在番茄中的表达第94-103页
   ·材料与试剂第94页
   ·方法第94-97页
     ·pBIB2质粒导入农杆菌GV3103第94页
     ·PCR检测第94-95页
     ·GV3103介导的番茄遗传转化第95页
     ·转化番茄的鉴定第95-97页
       ·PCR检测第95-96页
       ·转化植株的Southern blot检测第96-97页
       ·转基因番茄RT-PCR检测第97页
       ·HPLC分析第97页
   ·结果第97-100页
     ·pBIB2转化番茄的出愈、分化、生根及大田种植第97-98页
     ·pBIB2转化番茄PCR检测及Southern blot分析第98-99页
     ·转基因植株RT-PCR检测第99页
     ·转化番茄植株白藜芦醇含量的测定第99-100页
   ·讨论第100-103页
     ·果实作为生物反应器的研究第100页
     ·白藜芦醇的生物学功能及转基因研究第100-101页
     ·BanLec基因启动子启动芪合酶基因在番茄中表达第101-102页
     ·构建含有葡萄芪合酶基因融合表达载体的意义第102-103页
10 结论第103-105页
参考文献第105-117页
附录:第117-129页
致谢第129页

 
 
论文编号BS1107542,这篇论文共129
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