| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1 马铃薯甲虫的发生和防治 | 第10-12页 |
| ·马铃薯甲虫的起源、传播以及分布 | 第10页 |
| ·马铃薯甲虫的防治 | 第10-12页 |
| 2 细胞色素P450氧化酶的研究进展 | 第12-21页 |
| ·细胞色素P450氧化酶的分布 | 第14-15页 |
| ·昆虫细胞色素P450氧化酶基因及蛋白的结构特点 | 第15-17页 |
| ·昆虫细胞色素P450氧化酶的功能 | 第17-21页 |
| 3 RNA干扰的研究进展 | 第21-23页 |
| ·RNA干扰机制 | 第21页 |
| ·RNA干扰的方法 | 第21-22页 |
| ·RNA干扰的生物学意义 | 第22-23页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 马铃薯甲虫细胞色素P450氧化酶基因的分子克隆和表达分析 | 第24-50页 |
| 1 材料与方法 | 第24-36页 |
| ·供试昆虫 | 第24-25页 |
| ·主要试剂和仪器设备 | 第25页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第25-29页 |
| ·马铃薯甲虫相关基因片段的筛选和验证 | 第29-33页 |
| ·马铃薯甲虫相关基因片段的全长克隆 | 第33-35页 |
| ·End to End验证 | 第35-36页 |
| ·三氟氯氰菊酯药剂实验 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-48页 |
| ·马铃薯甲虫细胞色素P450氧化酶基因的鉴定及农药诱导 | 第36-38页 |
| ·马铃薯甲虫细胞色素P450氧化酶基因的克隆及序列分析 | 第38-44页 |
| ·四种细胞色素P450氧化酶基因的特异性表达 | 第44-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 马铃薯甲虫4个细胞色素P450氧化酶基因的RNA干扰 | 第50-68页 |
| 1 材料与方法 | 第51-58页 |
| ·供试昆虫 | 第51页 |
| ·主要试剂和仪器设备 | 第51页 |
| ·马铃薯甲虫细胞色素P450氧化酶基因的RNA干扰表达载体的构建 | 第51-55页 |
| ·dsRNA菌液的喂食 | 第55-56页 |
| ·蜕皮激素类似物对RNA干扰的补偿实验 | 第56页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第56-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-65页 |
| ·细胞色素P450氧化酶基因dsRNA表达载体的构建 | 第58页 |
| ·dsLdCYP314A1的RNA干扰效应 | 第58-63页 |
| ·dsLdCYP412A1、dsLdCYP412A2和dsLdCYP413A1的RNA干扰效应 | 第63-65页 |
| 3 讨论 | 第65-68页 |
| 第四章 马铃薯甲虫4个细胞色素P450氧化酶基因的体外表达 | 第68-82页 |
| 1 材料与方法 | 第69-76页 |
| ·主要试剂和仪器设备 | 第69页 |
| ·马铃薯甲虫细胞色素P450氧化酶基因真核表达载体的构建 | 第69-73页 |
| ·昆虫细胞Sf9的培养 | 第73页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid DNA对昆虫细胞Sf9的转染 | 第73-74页 |
| ·SDS-PAGE及Western杂交 | 第74-75页 |
| ·细胞色素P450氧化酶CYP314A1的酶活测定 | 第75-76页 |
| ·细胞色素P450氧化酶CYP314A1的RP-HPLC检测 | 第76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-80页 |
| ·马铃薯甲虫细胞色素P450氧化酶真核表达载体的构建 | 第76-78页 |
| ·昆虫细胞Sf9感染重组杆状病毒Bacmid DNA后的症状 | 第78页 |
| ·Western杂交检测 | 第78-79页 |
| ·细胞色素P450氧化酶CYP314A1的酶活产物分析 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 全文总结 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-94页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第94-96页 |
| 附录 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
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