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己烯雌酚和双烯雌酚单克隆抗体的制备及ELISA方法的研究
 
     论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-18页
第一章 文献综述第18-26页
   ·己烯雌酚和双烯雌酚的理化性质第18-19页
   ·己烯雌酚和双烯雌酚的应用及危害第19-20页
   ·己烯雌酚和双烯雌酚的残留第20页
   ·己烯雌酚和双烯雌酚主要检测方法第20-24页
     ·气相色谱法第21页
     ·高效液相色谱法第21-22页
     ·气相色谱-质谱第22页
     ·液相色谱-质谱第22-23页
     ·毛细管电泳法第23页
     ·放射免疫法第23页
     ·酶联免疫吸附试验第23-24页
   ·本研究的目的和意义第24-26页
第二章 己烯雌酚和双烯雌酚人工抗原的合成与鉴定第26-37页
   ·实验材料第26-27页
     ·主要试剂第26页
     ·主要设备第26-27页
   ·实验方法第27-29页
     ·己烯雌酚人工抗原的合成第27-29页
       ·己烯雌酚-单羧基丙基醚(DES-CP)的合成第27页
       ·己烯雌酚-半琥珀酸(DES-HS)的合成第27页
       ·己烯雌酚-单羧基甲醚(DES-CM)的合成第27页
       ·己烯雌酚-单羧基丙基醚-BSA(DES-CP-BSA)的制备第27页
       ·己烯雌酚-单羧基丙基醚-OVA(DES-CP-OVA)的制备第27页
       ·己烯雌酚-半琥珀酸-OVA(DES-HS-OVA)的制备第27页
       ·己烯雌酚-单羧基甲醚-OVA(DES-CM-OVA)的制备第27-29页
     ·双烯雌酚人工抗原的合成第29页
       ·双烯雌酚-单羧基丙基醚(DIEN-CP)的合成第29页
       ·双烯雌酚-半琥珀酸(DIEN-HS)的合成第29页
       ·双烯雌酚-单羧基丙基醚-BSA(DIEN-CP-BSA)的制备第29页
       ·双烯雌酚-半琥珀酸-OVA(DIEN-HS-OVA)的制备第29页
   ·人工抗原合成的分析第29页
   ·结果第29-35页
     ·紫外分析第29-32页
     ·质谱分析第32-34页
     ·人工抗原浓度的测定第34-35页
   ·讨论第35-36页
     ·半抗原的合成第35页
     ·偶联比第35-36页
   ·小结第36-37页
第三章 己烯雌酚多克隆抗体的制备及鉴定第37-46页
   ·实验材料第37-38页
     ·主要试剂第37页
     ·主要设备第37页
     ·试验动物第37-38页
   ·实验方法第38-40页
     ·动物免疫第38页
     ·血清效价测定第38-39页
     ·血清竞争抑制筛选第39页
     ·建立DES 间接竞争ELISA 标准曲线第39页
     ·抗血清特异性的测定第39-40页
   ·结果第40-43页
     ·多抗效价测定第40页
     ·多抗竞争抑制测定第40-42页
     ·己烯雌酚间接竞争ELISA 标准曲线第42-43页
     ·交叉反应第43页
   ·讨论第43-45页
     ·半抗原与载体蛋白第43-44页
     ·免疫与抗体检测第44-45页
     ·间隔臂的影响第45页
   ·小结第45-46页
第四章 己烯雌酚和双烯雌酚单克隆抗体的制备及鉴定第46-63页
   ·实验材料第46-47页
     ·主要试剂第46-47页
     ·主要设备第47页
     ·试验动物第47页
     ·主要试剂配制第47页
   ·实验方法第47-53页
     ·小鼠免疫第47-48页
     ·骨髓瘤细胞的准备第48页
     ·脾细胞的准备第48-49页
     ·饲养细胞的准备第49页
     ·细胞融合第49页
     ·杂交瘤细胞的筛选第49-50页
     ·杂交瘤细胞克隆化第50页
     ·杂交瘤细胞的冻存与复苏第50-51页
     ·腹水的制备第51页
     ·腹水的纯化第51页
     ·单克隆抗体特性的鉴定第51-53页
       ·单克隆抗体的SDS-PAGE 电泳鉴定第51-52页
       ·杂交瘤细胞的染色体分析第52页
       ·单克隆抗体的亚型分析第52-53页
   ·结果第53-61页
     ·小鼠血清效价测定第53-54页
     ·小鼠血清竞争抑制测定第54-55页
     ·SP2/0 细胞的培养和观察第55页
     ·杂交瘤细胞的培养和观察第55-57页
     ·杂交瘤细胞的阳性筛选、克隆和建株第57页
     ·纯化腹水单克隆抗体浓度的测定第57页
     ·杂交瘤细胞染色体分析第57-58页
     ·单克隆抗体纯度的测定第58-59页
     ·单克隆抗体的亚型分析第59-60页
     ·单克隆抗体效价的测定第60页
     ·杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性第60-61页
   ·讨论第61-62页
     ·动物免疫第61页
     ·融合与筛选及克隆第61-62页
   ·小结第62-63页
第五章 己烯雌酚和双烯雌酚间接竞争ELISA 方法的建立第63-83页
   ·实验材料第63-64页
     ·主要试剂第63页
     ·主要设备第63-64页
   ·实验方法第64-65页
     ·ELISA 条件的优化第64页
     ·包被原和抗体最佳工作浓度的选择第64页
     ·包被方式的选择第64页
     ·封闭时间的选择第64页
     ·一抗反应时间的选择第64页
     ·酶标二抗反应时间的选择第64页
     ·离子强度的影响第64-65页
     ·pH 的影响第65页
   ·己烯雌酚和双烯雌酚ELISA 参数的确定第65页
     ·ELISA 标准曲线的建立第65页
     ·特异性分析第65页
     ·检测限和定量限的确定第65页
     ·精密度的测定第65页
     ·保存期试验第65页
   ·添加回收测定第65-66页
   ·实测样品第66页
   ·与国外试剂盒比较第66页
   ·结果第66-80页
     ·包被原和抗体工作浓度的确定第66-68页
     ·包被方式的确定第68-69页
     ·封闭时间的确定第69-70页
     ·一抗反应时间的确定第70-71页
     ·酶标二抗反应时间的确定第71-72页
     ·离子强度的确定第72-73页
     ·pH 的确定第73页
     ·DES 和DIEN 间接竞争ELISA 标准曲线第73-75页
     ·特异性分析第75-76页
     ·检测限和定量限的确定第76-77页
     ·精密度的确定第77-78页
     ·保存期试验第78-79页
     ·添加回收率第79-80页
     ·实际样品检测结果第80页
   ·讨论第80-81页
     ·ELISA 的影响因素第80-81页
     ·样品提取与净化第81页
   ·小结第81-83页
第六章 全文结论第83-84页
参考文献第84-92页
致谢第92-93页
作者简历第93页

 
 
论文编号BS158649,这篇论文共93
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