| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 1 绪论 | 第8-14页 |
| ·研究背景 | 第8-12页 |
| ·蝗虫对农业的危害 | 第8页 |
| ·国内外防蝗治灾的措施 | 第8-9页 |
| ·绿僵菌杀蝗剂的优缺点 | 第9-10页 |
| ·海藻糖及真菌海藻糖酶 | 第10-12页 |
| ·研究目的及意义 | 第12-13页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第13页 |
| ·本研究的创新性 | 第13-14页 |
| 2 金龟子绿僵菌中性海藻糖酶的超表达及RNA 干扰 | 第14-37页 |
| ·技术路线 | 第14-16页 |
| ·金龟子绿僵菌中性海藻糖酶的超表达载体构建 | 第14-15页 |
| ·金龟子绿僵菌中性海藻糖酶的RNA 干扰载体构建 | 第15-16页 |
| ·超表达载体与干扰载体基因枪法转化金龟子绿僵菌及转化菌株筛选验证 | 第16页 |
| ·材料和方法 | 第16-28页 |
| ·试验菌株与质粒 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·主要溶液配制 | 第16-17页 |
| ·主要仪器与设备 | 第17页 |
| ·抗除草剂筛选的超表达载体的构建 | 第17-23页 |
| ·抗除草剂筛选的RNA 干扰载体的构建 | 第23-24页 |
| ·金龟子绿僵菌中性海藻糖酶基因全长和RNAi 片段的PCR 扩增和克隆 | 第24-26页 |
| ·金龟子绿僵菌中性海藻糖酶基因的超表达载体和RNAi 载体的构建 | 第26页 |
| ·中性海藻糖酶基因超表达载体和RNA 干扰载体转化金龟子绿僵菌分生孢子 | 第26-27页 |
| ·转化菌株的筛选及鉴定 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-33页 |
| ·Bar 基因启动子片段、Bar 基因片段、Bar 基因终止子片段的PCR 扩增、回收纯化及连接和测序 | 第28-29页 |
| ·金龟子绿僵菌CQMa102 中性海藻糖酶基因全长及干扰片段的扩增和测序 | 第29页 |
| ·含抗除草剂筛选的金龟子绿僵菌CQMa102 中性海藻糖酶基因超表达载体的构建 | 第29-31页 |
| ·含抗除草剂筛选的金龟子绿僵菌CQMa102 中性海藻糖酶基因RNA 干扰载体的构建 | 第31-32页 |
| ·绿僵菌中性海藻糖酶基因的超表达及RNA 干扰转化菌株的筛选结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-37页 |
| ·关于真菌的遗传转化方法 | 第33-34页 |
| ·关于基因枪转化法 | 第34页 |
| ·RNA 干扰技术 | 第34-36页 |
| ·超表达 | 第36-37页 |
| 3 中性海藻糖酶基因 mRNA 含量、海藻糖含量、中性海藻糖 酶酶活与菌株耐热性 | 第37-48页 |
| ·技术路线 | 第37页 |
| ·材料和方法 | 第37-41页 |
| ·试验菌株 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器与设备 | 第37页 |
| ·对数生长期NTL mRNA 含量比较分析 | 第37-39页 |
| ·转化菌株和出发菌株孢子内海藻糖含量及中性海藻糖酶活的测定 | 第39-40页 |
| ·转化菌株和出发菌株孢子耐热性的比较分析 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-44页 |
| ·转化菌株与出发菌株中性海藻糖酶基因mRNA 含量比较分析 | 第41-43页 |
| ·转化菌株与出发菌株中性海藻糖含量与中性海藻糖酶酶活分析 | 第43页 |
| ·转化菌株与出发菌株的耐热性比较分析 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-48页 |
| ·荧光定量PCR | 第44-46页 |
| ·海藻糖与耐热性 | 第46-48页 |
| 4 毒力测试 | 第48-50页 |
| ·技术路线 | 第48页 |
| ·材料和方法 | 第48-49页 |
| ·试验菌株与供试昆虫 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·分生孢子的准备 | 第48页 |
| ·转化菌株与出发菌株对东亚飞蝗的活性测试 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 5 结论与展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58页 |
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