| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-20页 |
| ·缺氧诱导因子 1 alpha 概述 | 第13-16页 |
| ·以缺氧诱导因子 1 alpha 为靶向的抗癌研究进展 | 第16-19页 |
| ·本文设计思路和创新点 | 第19-20页 |
| 第2章 新生霉素干扰 HIF1α CTAD/p300 CH1 复合物的形成 | 第20-39页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·表达系统 | 第20页 |
| ·HIF1α 片段氨基酸序列 | 第20-23页 |
| ·主要试剂与相关仪器 | 第23-27页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·溶液 | 第24-26页 |
| ·主要仪器与用品 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-34页 |
| ·Hela 细胞核抽提物的准备 | 第27-28页 |
| ·昆虫细胞表达系统蛋白表达与纯化 | 第28页 |
| ·重组 GST 融合蛋白的表达与纯化 | 第28-29页 |
| ·重组 HIS 融合蛋白的表达与亲和纯化 | 第29-30页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳与免疫印记 | 第30-31页 |
| ·GST-pull down assay | 第31-32页 |
| ·CoCl2处理诱导细胞缺氧 | 第32页 |
| ·His-pull down assay | 第32-33页 |
| ·HPC4-pull down assay | 第33-34页 |
| ·实验结果 | 第34-39页 |
| ·HIF1α 片段构建 | 第34页 |
| ·HIF1α 425、HIF1α 776、全长 HIF1α 能够与内源 p300 结合 | 第34-35页 |
| ·新生霉素抑制 His-HIF1α FL 蛋白与 p300 CH1 的结合 | 第35-36页 |
| ·新生霉素抑制 GST-p300 CH1 结构域与 HIF1α 全长的结合 | 第36-37页 |
| ·新生霉素能够直接干扰 HIF1α CTAD/p300 CH1 复合物的形成, 并且抑制过表达 HIF1α 全长与内源 p300 在正常条件和缺氧条件下的结合 | 第37-39页 |
| 第3章 新生霉素能够特异性地阻断 HIF1α CTAD 和 P300 CH1 之间的相互作用 | 第39-42页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·GST-pull down assay | 第39页 |
| ·His-pull down assay | 第39-40页 |
| ·实验结果 | 第40-42页 |
| ·顺铂不能够阻断 HIF1α CTAD /p300 CH1 复合物的形成 | 第40页 |
| ·格尔德霉素不影响 HIF1α 与 p300 CH1 的相互作用 | 第40-42页 |
| 第4章 新生霉素能够直接与 HIF1α C 末端活性结构域（CTAD）结合 | 第42-47页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·试剂 | 第42页 |
| ·溶液 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-44页 |
| ·新生霉素固定琼脂糖凝胶的制备 | 第43页 |
| ·新生霉素固定琼脂糖凝胶 pull down 实验 | 第43-44页 |
| ·实验结果 | 第44-47页 |
| ·新生霉素与 HIF1α CTAD 结构域直接结合 | 第44页 |
| ·新生霉素直接与 HIF1α CTAD 结构域特异性结合 | 第44-46页 |
| ·p300 CH1 不能与 HIF1α CTAD 竞争性的结合新生霉素 | 第46-47页 |
| 第5章 新生霉素对 HIF1α 靶基因 CA9 的下调作用可能与 MTOR 通路有关 | 第47-56页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·主要试剂与引物 | 第48-50页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第48-49页 |
| ·引物与序列 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-51页 |
| ·细胞培养 | 第50页 |
| ·反转录 PCR | 第50页 |
| ·细胞瞬时转染实验 | 第50-51页 |
| ·萤光素酶检测系统 | 第51页 |
| ·实验结果 | 第51-56页 |
| ·新生霉素抑制 HIF1α CTAD 结构域介导的报告基因反式激活作用 | 第51-53页 |
| ·新生霉素下调 HIF1αα下游调控基因表达量 | 第53-54页 |
| ·新生霉素干扰 MCF-7 细胞中 mTOR 通路基因的表达 | 第54-56页 |
| 第6章 新生霉素抑制肿瘤细胞生长 | 第56-63页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·siRNA 序列 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-58页 |
| ·软琼脂克隆形成（Soft-agar colony formation）实验 | 第56-57页 |
| ·细胞瞬时转染实验 | 第57页 |
| ·细胞增殖实验 | 第57页 |
| ·siRNA 敲除实验 | 第57-58页 |
| ·统计学分析 | 第58页 |
| ·实验结果 | 第58-63页 |
| ·新生霉素能够显著抑制 A549 和 MCF-7 的克隆形成 | 第58-59页 |
| ·HIF1α CTAD 能够拯救新生霉素对 MCF-7 细胞克隆形成的抑制作用 | 第59-61页 |
| ·siRNA 敲除 HIF1α 不影响 MCF-7 细胞扩增 | 第61-63页 |
| 第7章 讨论 | 第63-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
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