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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白CotC表面展示海藻糖合酶的技术研究
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枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白CotC表面展示海藻糖合酶的技术研究
 
     论文目录
 
摘要第8-9页
ABSTRACT第9页
第1章 绪论第10-22页
    1.1 海藻糖和海藻糖合酶的研究现状第10-14页
        1.1.1 海藻糖简介第10页
        1.1.2 生产海藻糖的方法第10-11页
        1.1.3 海藻糖的应用前景第11-12页
        1.1.4 海藻糖合酶的来源第12-13页
        1.1.5 海藻糖合酶分子生物学方面的研究第13-14页
    1.2 表面展示技术研究概况第14-17页
        1.2.1 芽孢表面展示系统第15页
        1.2.2 芽孢的结构与形成第15-16页
        1.2.3 枯草芽孢杆菌芽孢表面展示系统的优势第16-17页
        1.2.4 枯草芽孢杆菌芽孢表面展示技术的应用第17页
    1.3 增强型绿色荧光蛋白简介与应用第17-18页
        1.3.1 绿色荧光蛋白的来源与特点第17-18页
        1.3.2 EGFP在芽孢表面展示系统中的应用第18页
    1.4 立题背景和研究内容第18-22页
        1.4.1 立题背景第18-19页
        1.4.2 研究内容第19-22页
第2章 荧光蛋白基因克隆与枯草芽孢杆菌芽孢表面展示系统的构建第22-48页
    2.1 引言第22页
    2.2 实验材料第22-25页
        2.2.1 菌株和质粒第22-23页
        2.2.2 主要试剂第23-24页
        2.2.3 其他常用试剂第24页
        2.2.4 培养基第24-25页
        2.2.5 主要仪器和设备第25页
    2.3 实验方法第25-36页
        2.3.1 枯草芽孢杆菌(B.subtilis 168)基因组的提取第25-26页
        2.3.2 编码芽孢衣壳蛋白基因cotC的克隆第26页
        2.3.3 PCR产物的核酸凝胶电泳鉴定与胶回收第26-27页
        2.3.4 amyEF基因与amyER基因的克隆与验证第27页
        2.3.5 pEGFP-N1质粒的提取与验证第27-28页
        2.3.6 质粒PCR反应体系与扩增程序第28页
        2.3.7 pHT01质粒的提取与验证第28页
        2.3.8 线性化克隆载体pTOPO-amyEF-CotC-egfp的制备第28-31页
        2.3.9 重组质粒pTOPO-cotC-egfp的构建第31-33页
        2.3.10 Pme I线性化重组质粒pTOPO-cotC-egfp及重组质粒的浓缩第33页
        2.3.11 线性化的重组质粒转化B.subtilis 168第33-34页
        2.3.12 重组菌B. Subtilis 168/pTOPO-cotC-egfp的筛选与鉴定第34页
        2.3.13 芽孢衣壳蛋白基因cotB、cotG和cotX的PCR扩增与胶回收第34页
        2.3.14 整合型表达质粒B. Subtilis 168-cot BGX-egfp的构建第34-35页
        2.3.15 表面展示EGFP重组质粒的转化与重组子的筛选鉴定第35-36页
        2.3.16 重组菌芽孢悬浮液的制备第36页
        2.3.17 枯草芽孢杆菌芽孢表面表达EGFP的情况分析第36页
    2.4 结果与讨论第36-47页
        2.4.1 枯草芽孢杆菌基因组的提取第36-37页
        2.4.2 质粒pEGFP-N1和pHT01的提取第37-38页
        2.4.3 目的基因的扩增第38-39页
        2.4.4 整合型重组质粒的构建及重组子的筛选与鉴定第39-41页
        2.4.5 枯草芽孢杆菌转化子菌落PCR鉴定第41-42页
        2.4.6 芽孢蛋白基因cotB、cotG、cot X的扩增第42页
        2.4.7 重组T载体的构建及菌落PCR验证第42-44页
        2.4.8 重组枯草芽孢杆菌转化子菌落PCR鉴定第44-45页
        2.4.9 荧光显微镜观察与流式细胞仪分析第45-47页
    2.5 本章小结第47-48页
第3章 海藻糖合酶芽孢表面展示系统的构建第48-54页
    3.1 引言第48页
    3.2 实验材料第48-49页
        3.2.1 实验菌株第48-49页
        3.2.2 主要仪器和设备第49页
        3.2.3 主要试剂第49页
        3.2.4 引物设计第49页
    3.3 实验方法第49-50页
        3.3.1 海藻糖合酶基因的扩增第49页
        3.3.2 重组枯草芽孢杆菌B. Subtilis 168/pTOPO-cotC-tres的构建第49-50页
        3.3.3 芽孢表面展示海藻糖合酶的检测及酶活测定第50页
    3.4 结果与讨论第50-52页
        3.4.1 目的基因tres的扩增第50-51页
        3.4.2 重组质粒pTOPO-cotC-tres的构建第51-52页
        3.4.3 B.Subtilis 168/pTOPO-cotC-tres外源蛋白的检测及酶活测定第52页
    3.5 本章小结第52-54页
第4章 重组枯草芽孢杆菌产芽孢发酵条件及酶学性质研究第54-64页
    4.1 引言第54页
    4.2 实验材料第54-55页
        4.2.1 菌株第54页
        4.2.2 培养基第54-55页
        4.2.3 主要仪器第55页
    4.3 实验方法第55-56页
        4.3.1 种子培养方法第55页
        4.3.2 发酵方法第55页
        4.3.3 海藻糖合酶酶活定义第55-56页
    4.4 芽孢表面展示海藻糖合酶的酶学性质研究第56页
        4.4.1 表面展示海藻糖合酶的最适反应温度及温度耐受性研究第56页
        4.4.2 表面展示海藻糖合酶的最适反应pH及pH耐受性研究第56页
    4.5 结果与讨论第56-63页
        4.5.1 碳源优化结果第56-57页
        4.5.2 氮源优化结果第57-58页
        4.5.3 无机盐优化结果第58-59页
        4.5.4 不同pH对芽孢形成的影响第59-60页
        4.5.5 不同温度对芽孢形成的影响第60页
        4.5.6 表面展示海藻糖合酶的最适反应温度及温度耐受性研究第60-62页
        4.5.7 表面展示海藻糖合酶的最适反应pH及pH耐受性研究第62-63页
    4.6 本章小结第63-64页
第5章 结论与展望第64-66页
    5.1 结论第64-65页
    5.2 展望第65-66页
参考文献第66-72页
致谢第72-74页
在学期间主要科研成果第74页

 
 
论文编号BS3211708,这篇论文共74
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