中文摘要 | 第8-11页 |
ABSTRACT | 第11-14页 |
引言 | 第15-16页 |
符号与缩略语 | 第16-17页 |
第一篇 文献综述 | 第17-35页 |
第一章 副溶血弧菌相关毒力因子及其致病机理的研究进展 | 第17-35页 |
1 副溶血弧菌的流行史 | 第17-18页 |
2 副溶血弧菌分子检测技术的发展 | 第18-19页 |
2.1 传统的PCR技术 | 第18页 |
2.2 实时荧光定量PCR技术 | 第18页 |
2.3 环介导等温扩增技术 | 第18-19页 |
2.4 液相芯片技术 | 第19页 |
3 副溶血弧菌的主要毒力因子 | 第19-23页 |
3.1 密度感应 | 第19页 |
3.2 细菌黏附作用 | 第19-20页 |
3.3 铁摄取调节系统 | 第20页 |
3.4 溶血素 | 第20-21页 |
3.5 Ⅲ型分泌系统 | 第21-23页 |
3.6 Ⅵ型分泌系统 | 第23页 |
4 转录调控因子 | 第23-25页 |
4.1 HutC | 第23-25页 |
参考文献 | 第25-35页 |
第二篇 试验研究 | 第35-105页 |
第二章 副溶血弧菌主要毒力因子三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用 | 第35-51页 |
1 材料与方法 | 第36-39页 |
1.1 菌株与引物设计 | 第36-37页 |
1.2 仪器与试剂 | 第37页 |
1.3 模板DNA的制备 | 第37-38页 |
1.4 标准品的制备 | 第38页 |
1.5 副溶血弧菌三重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第38-39页 |
1.6 人工染菌样品的检测 | 第39页 |
2 结果与分析 | 第39-45页 |
2.1 目的片段的PCR扩增和重组质粒PCR鉴定 | 第39-40页 |
2.2 副溶血弧菌三重荧光定量PCR检测方法的建立 | 第40-45页 |
3 讨论 | 第45-47页 |
参考文献 | 第47-51页 |
第三章 副溶血弧菌GntR基因缺失株、互补株的构建及GntR蛋白表达 | 第51-71页 |
1 材料与方法 | 第52-61页 |
1.1 菌株、质粒与引物 | 第52-53页 |
1.2 仪器与试剂 | 第53-54页 |
1.3 gntR基因缺失株的构建 | 第54-56页 |
1.4 构建gntR基因互补株 | 第56页 |
1.5 荧光定量PCR检测基因转录水平 | 第56-58页 |
1.6 遗传稳定性分析 | 第58页 |
1.7 生长曲线的测定 | 第58页 |
1.8 GntR蛋白的原核表达 | 第58-61页 |
2 结果与分析 | 第61-68页 |
2.1 gntR基因缺失株的构建与鉴定 | 第61-62页 |
2.2 互补株C△gntR的构建与鉴定 | 第62-63页 |
2.3 荧光定量PCR检测 | 第63-64页 |
2.4 遗传稳定性分析 | 第64页 |
2.5 生长曲线的测定 | 第64-65页 |
2.6 gntR的基因的PCR扩增 | 第65-66页 |
2.7 蛋白重组表达质粒的鉴定 | 第66页 |
2.8 原核表达产物的SDS-PAGE及可溶性分析 | 第66-67页 |
2.9 Western-blot分析 | 第67-68页 |
3 讨论 | 第68-70页 |
参考文献 | 第70-71页 |
第四章 GntR基因缺失株的生物学特性及致病性分析 | 第71-85页 |
1 材料与方法 | 第72-75页 |
1.1 菌株 | 第72页 |
1.2 细胞及试验动物 | 第72页 |
1.3 仪器与试剂 | 第72-73页 |
1.4 细菌运动性检测 | 第73页 |
1.5 环境压力耐受因子检测 | 第73-74页 |
1.6 细胞毒性试验 | 第74页 |
1.7 半数致死量(LD_(50))的测定 | 第74-75页 |
2 结果与分析 | 第75-81页 |
2.1 对运动性的影响 | 第75-76页 |
2.2 对生物被膜形成能力的分析 | 第76页 |
2.3 环境压力耐受因子检测 | 第76-79页 |
2.4 对细胞毒性的影响 | 第79-80页 |
2.5 对ICR小鼠LD50的测定 | 第80-81页 |
3 讨论 | 第81-83页 |
参考文献 | 第83-85页 |
第五章 转录组深度测序技术比较分析野生株SH112和GntR基因缺失株转录差异基因 | 第85-105页 |
1 材料与方法 | 第86-91页 |
1.1 菌株与质粒 | 第86页 |
1.2 仪器与试剂 | 第86页 |
1.3 转录组深度测序样品的准备 | 第86-87页 |
1.4 转录组分析 | 第87-88页 |
1.5 荧光定量PCR检测转录水平 | 第88-89页 |
1.6 β-半乳糖苷酶检测启动子活性 | 第89-91页 |
2 结果与分析 | 第91-100页 |
2.1 显著差异表达基因筛选 | 第91-93页 |
2.2 KGEE Pathway、GO分析 | 第93-97页 |
2.3 荧光定量验证表达量差异基因 | 第97-98页 |
2.4 β-半乳糖苷酶检测启动子活性 | 第98-100页 |
3 讨论 | 第100-102页 |
参考文献 | 第102-105页 |
全文总结 | 第105-107页 |
创新点 | 第107-109页 |
致谢 | 第109-111页 |
攻读硕士学位期间发表的论文 | 第111页 |
第一作者论文 | 第111页 |
非第一作者论文 | 第111页 |