| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·我国棉花生产概述 | 第10-11页 |
| ·棉花生产的重要性 | 第10页 |
| ·我国棉花生产现状 | 第10-11页 |
| ·苹果酸脱氢酶简介 | 第11-18页 |
| ·苹果酸脱氢酶的性质 | 第11-12页 |
| ·苹果酸脱氢酶的结构及功能 | 第12-13页 |
| ·苹果酸脱氢酶参与的代谢途径 | 第13-17页 |
| ·苹果酸脱氢酶的用途 | 第17-18页 |
| ·重金属离子对植物的危害 | 第18-19页 |
| ·土壤中重金属离子的污染现状 | 第18页 |
| ·土壤中的铝离子 | 第18-19页 |
| ·植物对金属离子的胁迫适应机制 | 第19页 |
| ·MDH 基因国内外研究现状 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 棉花 GhMDH 基因克隆及其序列分析 | 第22-42页 |
| ·前言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·酶与试剂 | 第22页 |
| ·溶液配方及常用抗生素与激素的配置 | 第22-24页 |
| ·模板与引物 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·仪器与设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-35页 |
| ·GhMDH 基因的克隆 | 第26-35页 |
| ·序列分析 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-41页 |
| ·总 RNA 的提取和棉花 GhMDH 基因 EST 目的片段的扩增 | 第35-36页 |
| ·棉花 GhMDH 基因克隆 | 第36-38页 |
| ·棉花 GhMDH 基因氨基酸序列分析 | 第38-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 第三章 原核表达载体构建及蛋白质表达 | 第42-57页 |
| ·前言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-46页 |
| ·菌株与载体 | 第42页 |
| ·酶与试剂 | 第42页 |
| ·溶液配方及常用抗生素与激素的配置 | 第42-45页 |
| ·模板与引物 | 第45-46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·仪器与设备 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-51页 |
| ·带有酶切位点的 GhMDH 基因（简称原核 GhMDH）扩增 | 第46页 |
| ·原核 GhMDH 基因克隆到 pGEM-Teasy 上及序列检测 | 第46-47页 |
| ·pGEM-T-原核 GhMDH 质粒提取 | 第47页 |
| ·pGEM-T-原核 GhMDH 双酶切及酶切产物回收 | 第47页 |
| ·pET-23b 载体双酶切及酶切产物回收 | 第47-48页 |
| ·目的基因和表达载体的连接 | 第48页 |
| ·转化感受态大肠杆菌 | 第48-49页 |
| ·原核表达载体 pET-23b- GhMDH 的酶切鉴定 | 第49页 |
| ·工程菌的制备 | 第49页 |
| ·GhMDH 酶蛋白诱导 | 第49-50页 |
| ·GhMDH 酶蛋白分离纯化及包涵体复性 | 第50页 |
| ·重组蛋白酶活性测定 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-55页 |
| ·重组质粒 pGEM-T-原核 GhMDH 的构建与分析 | 第51页 |
| ·原核表达载体 pET-23b- GhMDH 的构建与分析 | 第51-52页 |
| ·工程菌的制备及 PCR 鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白的诱导与纯化 | 第53-54页 |
| ·GhMDH 酶活性分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 真核表达载体构建及烟草遗传转化 | 第57-75页 |
| ·前言 | 第57页 |
| ·实验材料 | 第57-60页 |
| ·菌株与载体 | 第57页 |
| ·酶与试剂 | 第57页 |
| ·溶液配方及常用抗生素与激素的配置 | 第57-58页 |
| ·模板与引物 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58-60页 |
| ·仪器与设备 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-67页 |
| ·带有酶切位点的 GhMDH 基因（简称真核 GhMDH）扩增 | 第60-61页 |
| ·真核 GhMDH 基因克隆到 PGEM-Teasy 上及序列检测 | 第61页 |
| ·pGEM-T-真核 GhMDH 质粒提取 | 第61页 |
| ·pGEM-T-真核 GhMDH 双酶切及酶切产物回收 | 第61页 |
| ·pBin438 载体双酶切及酶切产物回收 | 第61页 |
| ·目的基因和表达载体的连接 | 第61-62页 |
| ·转化感受态大肠杆菌 | 第62页 |
| ·真核表达载体 pBin438- GhMDH 的酶切鉴定 | 第62页 |
| ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备 | 第62-63页 |
| ·农杆菌的电击转化 | 第63页 |
| ·烟草无菌苗的培养 | 第63-64页 |
| ·烟草转化 | 第64-65页 |
| ·转基因烟草植株筛选 | 第65-66页 |
| ·转基因烟草植株耐铝性测定 | 第66-67页 |
| ·结果与分析 | 第67-72页 |
| ·重组质粒 pGEM-T-真核 GhMDH 的构建与分析 | 第67页 |
| ·真核表达载体 pBin438- GhMDH 的构建与分析 | 第67-68页 |
| ·工程菌的制备及 PCR 鉴定 | 第68-69页 |
| ·烟草转化结果 | 第69-70页 |
| ·影响转化效率相关因素 | 第70页 |
| ·转基因烟草耐铝性测定 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| 第五章 结论与展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简介 | 第84-85页 |
| 导师简介 | 第85-86页 |
| 导师简介 | 第86-87页 |
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