| 摘要 | 第9-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 缩略词表 | 第17-19页 |
| 1 文献综述 | 第19-49页 |
| 1.1 PRRSV研究现状 | 第19-29页 |
| 1.1.1 PRRSV在世界范围内的传播 | 第19-21页 |
| 1.1.2 PRRSV造成的危害和病毒分离 | 第21-23页 |
| 1.1.3 PRRSV的培养方法和鉴定 | 第23-25页 |
| 1.1.4 PRRSV的基因组与蛋白 | 第25-29页 |
| 1.2 PRRSV的受体研究 | 第29-38页 |
| 1.2.1 硫酸肝素(Heparin su1fate,HS) | 第29-30页 |
| 1.2.2 CD163分子 | 第30-32页 |
| 1.2.3 唾液酸粘附素(Sialoadhesin,SN) | 第32-34页 |
| 1.2.4 组织蛋白酶E或天冬氨酸酶E(Cathepsin E,CTSE) | 第34-36页 |
| 1.2.5 波形蛋白(Vimentin) | 第36-37页 |
| 1.2.6 PRRSV受体研究趋势 | 第37-38页 |
| 1.3 病毒免疫的相关研究 | 第38-40页 |
| 1.3.1 PRRSV的体液免疫 | 第38-39页 |
| 1.3.2 PRRSV的细胞免疫 | 第39页 |
| 1.3.3 PRRSV的免疫抑制 | 第39-40页 |
| 1.3.4 PRRSV的免疫调节 | 第40页 |
| 1.4 蛋白质分子结构的研究方法 | 第40-49页 |
| 1.4.1 蛋白质的结构在生命科学研究中的意义 | 第40-43页 |
| 1.4.2 蛋白质结构预测 | 第43-45页 |
| 1.4.3 分子动力学方法 | 第45-46页 |
| 1.4.4 分子动力学模拟常用软件 | 第46-48页 |
| 1.4.5 分子动力学蛋白模拟的基本步骤 | 第48-49页 |
| 2 研究目的与意义 | 第49-50页 |
| 3 试验材料与方法 | 第50-77页 |
| 3.1 生物信息学软件 | 第50页 |
| 3.2 试验材料和仪器 | 第50-51页 |
| 3.3 生物信息学方法 | 第51-53页 |
| 3.3.1 糖基化和信号肽预测 | 第51页 |
| 3.3.2 蛋白功能区域预测 | 第51页 |
| 3.3.3 同源结构比对 | 第51-52页 |
| 3.3.4 Desmond软件动力学分析 | 第52页 |
| 3.3.5 Chimera分子突变结构观察 | 第52-53页 |
| 3.3.6 Castp软件进行计算蛋白的Cavity | 第53页 |
| 3.4 试验技术 | 第53-77页 |
| 3.4.1 293T细胞培养 | 第53-54页 |
| 3.4.2 细胞接种病毒和收毒 | 第54页 |
| 3.4.3 病毒TCID50测定 | 第54-55页 |
| 3.4.4 猪和牛全血的提取 | 第55页 |
| 3.4.5 猪和牛全血中RNA的提取 | 第55-56页 |
| 3.4.6 反转录PCR | 第56-57页 |
| 3.4.7 受体SN基因前150个氨基酸目的片段的扩增和酶切 | 第57-58页 |
| 3.4.8 受体SN跨膜片段的扩增和酶切 | 第58-59页 |
| 3.4.9 受体SN目的片段的回收 | 第59页 |
| 3.4.10 受体SN目的片段连接入载体 | 第59-61页 |
| 3.4.11 载体的PCR检测 | 第61页 |
| 3.4.12 突变载体的构建 | 第61-63页 |
| 3.4.13 转化DH5大肠杆菌 | 第63-64页 |
| 3.4.14 质粒提取 | 第64页 |
| 3.4.15 PCR检测连接了目的片段质粒 | 第64-65页 |
| 3.4.16 质粒大量提取 | 第65-66页 |
| 3.4.17 细胞转染 | 第66-67页 |
| 3.4.18 细胞免疫荧光试验 | 第67页 |
| 3.4.19 蛋白纯化 | 第67-69页 |
| 3.4.20 WB和FAR-WB试验 | 第69-74页 |
| 3.4.21 ELISA用于病毒和GFP蛋白定量 | 第74-75页 |
| 3.4.22 PRRSV和SN-GFP相互作用分析 | 第75-77页 |
| 4 结果 | 第77-104页 |
| 4.1 生物信息学预测结果 | 第77-92页 |
| 4.1.1 信号肽预测 | 第77-78页 |
| 4.1.2 糖基化预测结果 | 第78-79页 |
| 4.1.3 蛋白质功能域的预测 | 第79-81页 |
| 4.1.4 鼠和猪mSN蛋白结构比对和唾液酸配体结合位置分析 | 第81-85页 |
| 4.1.5 蛋白同源模型结构构建和多序列比对 | 第85-86页 |
| 4.1.6 分子动力学能量优化 | 第86-87页 |
| 4.1.7 蛋白模型质量的检测 | 第87-88页 |
| 4.1.8 模拟蛋白结构重叠 | 第88-90页 |
| 4.1.9 SN第107位点突变对SN蛋白结构功能影响的分析 | 第90-92页 |
| 4.2 受体SN基因位点与PRRSV结合力的分析 | 第92-104页 |
| 4.2.1 RNA提取及质量检测、cDNA反转录 | 第92-93页 |
| 4.2.2 受体SN基因N端150个氨基酸的cDNA片段SN的克隆、SN-GFP融合表达载体构建 | 第93-95页 |
| 4.2.3 受体SN基因N端150个氨基酸的cDNA片段点突变体的构建 | 第95页 |
| 4.2.4 受体SN基因N端150个氨基酸的cDNA片段点突变体的融合蛋白SN-GFP表达载体构建 | 第95页 |
| 4.2.5 受体SN基因跨膜cDNA片段的克隆、融合蛋白SN-GFP-M表达载体构建 | 第95-96页 |
| 4.2.6 融合蛋白表达载体的测序鉴定 | 第96-97页 |
| 4.2.7 细胞培养和病毒TCID50的测定 | 第97-98页 |
| 4.2.8 使用WB鉴定在293T细胞中表达的SN-GFP融合蛋白 | 第98页 |
| 4.2.9 利用FAR-WB技术分析SN-GFP蛋白和PRRSV的结合活性 | 第98-99页 |
| 4.2.10 利用ELISA方法分析SN-GFP蛋白和PRRSV的结合活性 | 第99-101页 |
| 4.2.11 利用免疫细胞荧光的技术分析SN-GFP-M蛋白和PRRSV相互作用的活性 | 第101-104页 |
| 5 讨论 | 第104-110页 |
| 5.1 受体SN\受体CD163和PRRSV感染的关系 | 第104页 |
| 5.2 表达的SN-GFP和SN-GFP-M蛋白功能独立 | 第104-105页 |
| 5.3 受体SN结合PRRSV唾液酸功能区的信息学确定 | 第105页 |
| 5.4 PRRSV唾液酸在PRRSV感染中的作用 | 第105-107页 |
| 5.7 糖基化和PRRSV感染的关系 | 第107页 |
| 5.8 可变氨基酸在PRRSV唾液酸结合中的作用 | 第107-108页 |
| 5.9 受体SN第R107位氨基酸在PRRSV结合中的作用 | 第108页 |
| 5.10 受体SN有受体其它氨基酸在PRRSV结合中的作用 | 第108-110页 |
| 6 总结 | 第110-111页 |
| 6.1 本研究的结论 | 第110页 |
| 6.2 本研究的特色与创新 | 第110页 |
| 6.3 本研究的不足与进一步研究内容 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-118页 |
| 附录 | 第118-127页 |
| 在校期间发表文章和申请专利 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
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