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siRNA干扰嘌呤补救合成途径的关键酶对弓形虫增殖的抑制作用
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【制中药论文】刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)能侵犯包括人类在内的几乎所有温血动物有核细胞,其感染所致的弓形虫病是常见的人兽共患寄生虫病,对人类健康和畜牧业生产构成严重威胁。我国人群弓形虫血清阳性率约为7.88%〔1〕,随着人们饮食习惯及行为方式的改变,弓形虫感染率在我国呈上升的趋势,其感染所带来的危害受到越来越多人的关注。目前,对于弓形虫病的治疗仍以磺胺嘧啶(Sulfadia-zine,SDZ)和乙胺嘧啶(Pyrimethamine)的联合用药作为首要选择。但这种治疗方式存在明显的局限性,磺胺类药物只能抑制增殖状态的速殖子,而对相对静止和潜伏状态的包囊和缓殖子效果较差。该类药物还存在一系列毒副反应。因此寻求新的药物治疗靶标及新的治疗手段仍是弓形虫病防治研究的当务之急。
弓形虫不能进行嘌呤核苷酸的从头合成,只能依赖两条补救途径合成嘌呤核苷酸,参与的关键酶分别是腺苷激酶(AK)和次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)〔2〕。弓形虫嘌呤代谢的特点使得这两个关键酶成为备受关注的药物治疗靶点。小干扰RNA(siRNA )介导的RNA干扰(RNAi)已成为基因沉默的有力工具,被广泛应用于哺乳动物及多种低等生物的基因功能分析〔3-7〕。在很多感染性疾病〔8-9〕、恶性肿瘤及慢性神经变性疾病〔10-11〕,siRNA也被用于抑制致病基因表达,从而达到预防和治疗疾病的目的。但对于弓形虫,siR-NA介导的基因沉默及对虫体的生长抑制的相关研究却鲜有报道。本实验室在前期的研究中分别以AK与HXGPRT作为靶点,筛选到了2个siRNA(AK siRNA786和HXGPRT siRNA415)对各自酶活性具有显著的抑制作用〔12〕。本文将主要探讨这两个siRNA分子同时干扰AK和HXGPRT的酶活性后对弓形虫速殖子的增殖速率影响,为开发新的抗弓形虫药物及新的治疗方法奠定基础。
1 材料与方法
1.1 细胞和弓形虫虫株 HFF细胞为人包皮成纤维细胞,为本室液氮保种。弓形虫RH株速殖子由本室液氮保种、复苏、腹腔接种BALB/c
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