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抗人β淀粉样肽特异性单链抗体的噬菌体抗体库的构建与初步鉴定
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【西医学论文下载】作者：段朝晖，毛越苹，罗晓红，李民友，劳伟思，王英，朱振宇【摘要】 目的： 运用噬菌体展示技术构建抗人β淀粉样肽（Aβ）特异性单链抗体的抗体库并进行初步鉴定. 方法 ： 从Aβ免疫的BALB/c小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA，分离纯化mRNA，经逆转录合成其总cDNA. 以PCR方法分别扩增出抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因片段，再经重组PCR将两基因片段由编码十五肽(Gly4Ser)3的接头连在一起，克隆到噬菌粒载体pCANTAB 5E中，转化至大肠杆菌TG1，经辅助噬菌体M13KO7超感染后回收全部重组噬菌体，构建噬菌体抗体库，SDSPAGE 鉴定纯度. 结果： 经琼脂糖凝胶电泳 分析 ，RTPCR方法扩增的抗体VH和VL基因片段大小约350 bp和325 bp，与预期VH，VL基因片段 理论 值相符. 经重组PCR得到大小约750 bp的ScFv基因片段. ScFv基因片段经双酶切后成功定向克隆到噬菌粒载体，回收后构建成库容量为1.1×108的噬菌体抗体库，经SDSPAGE 鉴定，得到Mr约为30000 ku，纯度较好的ScFv抗体. 结论： 成功构建了库容量大的特异性噬菌体抗体库，为抗人Aβ特异性抗体的筛选、生物活性鉴定、临床实验诊断方法建立和 治疗 应用 打下基础.
【关键词】 噬菌体展示技术；单链抗体；阿尔茨海默病；β淀粉样肽
【Abstract】 AIM: To construct and identify the specific antihuman βamyloid peptide ScFv by phage antibody library display system. METHODS: Total RNA was extracted from spleen B cells of BALB/c mice immunized with βamyloid peptide, and mRNA was purified from the total RNA, then the firs
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