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人胎盘TRAIL基因cDNA的克隆和鉴定
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【西医临床医学论文】作者：李红梅, 宋天保 于月成, 辛晓燕, 张明, 许静洪【摘要】 目的：利用基因工程技术克隆TRAIL基因全长cDNA，并构建其原核表达载体. 方法 ：从人胎盘中提取总RNA，利用RTPCR技术扩增了TRAIL，将其连接于克隆载体pMD18T中，并通过酶切及测序鉴定载体构建的正确性. 结果： 应用 RTPCR技术和BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切成功获得1049 bp的目的片段，测序 分析 结果表明该基因序列与报道的TRAIL基因片段的序列完全相同. 结论：成功克隆了TRAIL基因的cDNA全长，为其在肿瘤生物 治疗 中的应用奠定了基础.
【关键词】 肿瘤坏死因子;细胞凋亡;配体；RTPCR；序列测定；人胎盘
0引言
1995年Wiley和Pitt首次从人的表达标签文库中发现一个与肿瘤坏死因子家族基因序列具有高度同源性的DNA克隆，其表达的蛋白具有诱导细胞凋亡的功能，因而将其命名为肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand，TRAIL）［1-2］. 作为一种新的凋亡诱导配体，肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)自发现以来，就一直倍受关注. 有关TRAIL和TRAIL受体以及其信号转导通路的 研究 己取得很大进展，而TRAIL特异性诱导肿瘤细胞凋亡的分子调控机制 目前 尚未阐明. 作为一种特异性诱导肿瘤细胞凋亡且无明显毒副作用的分子，TRAIL极有可能成为新的抗肿瘤制剂［3-4］. 研究表明，TRAIL在选择性诱导肿瘤细胞凋亡的同时对正常组织没有明显细胞毒性，并且和放、化疗有协同作用，使得TRAIL在肿瘤的治疗上具有广阔的前景［5-6］. 我们采用RTPCR方法克隆了TRAIL全长的基因片段，经酶切和测序证实其正确性，为进一步研究及临床应用奠定基础.
1材料和方法
1.1材料大肠杆菌DH5α由第四军医大学西京 医院 妇产科实验室保存，pMD18T载体、EcoRI, BamHI内切酶、T
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