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幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagX基因的克隆及生物信息学特征预测
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【主管药师论文】【摘要】 目的: 构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H. pylori) NCTC 11637 IV型分泌系统cagX(HP0528)全长编码基因的原核表达载体。 方法 : 用PCR方法从H. pylori基因组DNA中扩增cagX编码基因片段,将cagX克隆至pGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,再将其定向插入pET32a(+)载体中,经IPTG诱导表达。SDS-PAGE 分析 表达结果,并进行序列测定和生物信息学预测。结果: 克隆幽门螺杆菌NCTC 11637 cagX 基因全长1 569 bp(基因库登录号为EF608160),编码522个氨基酸,融合蛋白的相对分子质量约为80.5 kD。与基因库公布的其他H. pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为96%~99%。预测结果显示H. pylori 11637,26695,J99间二级结构有一定差异,但抗原性相同。结论: 成功克隆并表达了H. pylori NCTC 11637 cagX 基因,并对其生物学特征进行了预测,为进一步 研究 其生物学功能奠定了基础。 【关键词】 幽门螺杆菌; cagX; IV 型分泌系统; 生物信息; 序列分析 [Abstract] Objective: The prokaryotic expression vector for gene encoding the fusion protein cagX of type IV secretion system(TFSS) was constructed and expressed. Methods: H. pylori cagX gene was amplified by PCR using the genome DNA. The PCR product was inserted into pGEM-T vector and then transformed into E.coli DH5α. The positive recombinant clone was
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