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考马斯亮蓝显色法测定精浆蛋白水解酶
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【药学论文网】徐晓凤 黄宇烽摘要 用酪蛋白作底物，考马斯亮蓝显色，建立了精浆蛋白水解酶的测定方法。本法以0.05 mmol/L pH 7.6Tris-HCl作缓冲液，底物浓度为1 mg/ml，线性范围在535～4 280 U/L，批内CV为2.6%，批间CV3.3%。健康人精浆蛋白水解酶活力为1 420～2 870 U/L，不育患者(精液液化正常，n＝40)精浆蛋白水解酶活力为1 326～2 628 U/L，液化异常或粘稠度增高的不育患者精浆蛋白水解酶活力为540～852 U/L，提示精液液化异常或粘稠度增高的不育者，精浆蛋白水解酶活力显著降低。关键词 蛋白水解酶；精浆；不育症
多年的研究表明，精液中存在凝固及液化因子，其中前者主要来源于精囊，后者主要来源于前列腺，目前已发现多种参与或影响精液液化的因子，其中以蛋白酶系统最重要，其在精液液化过程中可能起到蛋白水解作用。Manala等［1］最近的研究证实了这一点。为此，本文［2］建立了一种精浆蛋白水解酶的测定方法，并就临床意义作了探讨，现将结果报告如下。
1 原理 在一定条件下,底物酪蛋白被精浆蛋白水解酶水解后,不再与考马斯亮蓝G250形成蓝色络合物,未被水解的酪蛋白量,与精浆蛋白水解酶呈反比,测定其含量推算出精浆蛋白水解酶的活力。
2 材料与方法2.1 材料 考马斯亮蓝G250(Fluka)，胰蛋白酶(Sigma)，经标定活力为10 700 U/mg，0.05 mol/L pH 7.6 Tris-HCl缓冲液。2.2 标本来源 正常男性精浆40份，不育男性精浆40份，其中液化正常者20份，液化异常或粘稠度增高的20份。2.3 胰蛋白酶标准液 称取胰蛋白酶5 mg加1000 ml生理盐水使成浓度为5 mg/L，相当于胰蛋白酶为53 500 U/L。并用生理盐水稀释成(U/L)535、1 070、1 750、2 675、5 350五种不同的浓度。2.4 考马斯亮蓝溶液 100 mg考马斯亮蓝G250溶于50 ml 95%乙醇中，加入100 ml85%磷酸，最后用蒸馏水稀释至1 000
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