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人β防御素4在大肠杆菌中的融合表达及其多克隆抗体的制备和鉴定
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【生物制药的论文】作者：曹玉红, 张光运, 张国成【摘要】 目的: 构建人β防御素4（human β defensin 4, HBD4）基因的原核融合表达载体PGEX4T2/mHBD4, 诱导GSTHBD4融合蛋白在大肠杆菌中表达, 并制备其多克隆抗体。方法: 从重组克隆载体PMD18T/HBD4中扩增HBD4成熟肽编码基因, 并克隆入PGEX4T2中, 在IPTG诱导下, 表达GSTHBD4融合蛋白。以表达的融合蛋白GSTHBD4作为免疫原免疫家兔制备抗GSTHBD4的抗血清, 抗体效价及特异性分别用ELISA和Western blot法鉴定。结果: 在大肠杆菌中成功表达Mr约为32000的融合蛋白GSTHBD4。ELISA法检测抗血清的效价可达到1∶128000, Western blot分析抗血清可与原核表达的融合蛋白GSTHBD4特异结合。结论: 在大肠杆菌中成功表达了GSTHBD4融合蛋白, 并制备了GSTHBD4的抗血清, 为进一步研究HBD4蛋白的结构和功能奠定了基础。
【关键词】 人β防御素4 基因克隆 融合表达
[Abstract] AIM: To construct the prokaryotic fusion expression vector of human β defensin 4 （HBD4）, and to express GSTHBD4 fusion protein in Escherichia coli （E.coli ）and prepare polyclonal antibody of GSTHBD4. METHODS: The gene encoding mature peptide of HBD4 （mHBD4）was amplified by PCR from cloning vector PMD18T/HBD4 which contained the fulllength HBD4 cDNA and then cloned into
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