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当前位置:教育论文中心首页--药学大专毕业论文--百草枯人工抗原的合成及抗体的制备
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百草枯人工抗原的合成及抗体的制备

【药学大专毕业论文】作者:杨婷婷, 孙秀兰, 邵景东, 王洪新【摘要】 目的: 制备百草枯人工抗原和抗血清, 为建立酶联免疫吸附法提供技术储备。方法: 以4, 4’联吡啶和碘甲烷为起始原料, 于暗处通氮气保护下合成了百草枯半抗原; 混合酸酐法偶联大分子蛋白载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)制备免疫抗原和包被抗原; 免疫新西兰大白兔, 制备多抗。结果: 合成的半抗原经HPLCMS、 1HNMR和IR鉴定, 初步确定合成成功; 百草枯半抗原与BSA和OVA的结合比分别为19∶1和14∶1; 抗血清经间接ELISA法检测, 效价达1∶2.56×104, 经饱和硫酸铵沉淀法纯化后抗体的效价达1∶5.12×104。结论: 合成的百草枯人工抗原具有较好的免疫原性, 为百草枯酶联免疫检测(ELISA)试剂盒的研制提供了基础。
【关键词】 百草枯; 抗原; 抗体; 免疫检测
百草枯(paraquat, PQ)又名克无踪、 对草快, 化学名为1, 1’二甲基4, 4’联吡啶阳离子盐, 是一种广谱、 灭生性有机杂环类除草剂[1]。百草枯可经胃肠道、 皮肤和呼吸道吸收, 易导致肺纤维化[2]。为了保护人类健康和环境安全, 许多国家严格限制使用百草枯[3]。我国2005年发布并实施的国家标准食品中最大农药残留限量中规定蔬菜、 柑橘、 小麦粉中百草枯的最大残留限量分别为0.05、 0.2、 0.5 ppm。高效液相色谱分析法、 气相色谱分析法等仪器分析法样本前处理及测定过程繁琐, 费用高, 不适于大量样本筛查。而酶联免疫吸附检测法(Enzymelinked Immunosorbent assay, ELISA)灵敏度高, 特异性强, 仪器设备要求低和样本前处理相对简单等优点, 适于现场监控和大量样本筛查。特异性抗体的制备是建立免疫分析法的必要前提。百草枯的相对分子质量(Mr)仅为257 000, 属于半抗原, 而且自身没有可供偶联的活性官能团(如氨基、 羧基等)。本研究在前期工作中, 选择百草枯结构类似物4, 4’联吡啶, 设
 
 
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