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当前位置:教育论文中心首页--药学毕业论文题目--RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用
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RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用

【药学毕业论文题目】作者:雒喜忠, 王阁, 许文, 李琼, 陈川, 张志敏, 胡庆, 王东【摘要】 目的: 制备RAI16蛋白的合成肽多克隆抗体, 并进行初步鉴定和应用, 为研究RAI16蛋白的功能及作用机制获得重要的实验工具。方法: 应用Fmoc法化学合成RAI16蛋白N端第44~55位氨基酸的多肽, 经C18的RPHPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的RAI16蛋白的多肽与KLH交联; 皮下注射抗原免疫新西兰纯种大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体。对纯化的抗体进行ELISA、 免疫组化、 Western blot等初步鉴定和应用。结果: 化学合成RAI16蛋白N端第44~55位氨基酸的多肽, 纯化后多肽纯度为96% , 达到免疫用抗原标准。多肽与KLH交联, 用于免疫动物。经纯化后的抗体效价为1∶125 000。该多肽抗体可特异识别人脾脏组织中相对分子质量(Mr)约为55 000的RAI16蛋白。结论: 所制备的多克隆抗体能与天然RAI16蛋白发生特异性反应, 可应用于ELISA、 免疫组化、 免疫沉淀和Western blot等实验, 为确定RAI16蛋白的组织分布和亚细胞定位、 研究RAI16蛋白的功能及作用机制提供了重要的实验工具。
【关键词】 视黄酸诱导蛋白16; 多肽抗原; 多克隆抗体; ELISA; 亲和层析
近几年在对视黄酸(RA)作用研究中发现了视黄酸诱导蛋白(RAI)系列基因, 但尚无具体完整的结构和功能研究的相关报道, 只是推测RAI 系列蛋白可能是一种“新型”的胞内参与信号转导转录调控的蛋白质家族。视黄酸诱导蛋白16(RAI16)蛋白作为家族成员之一, 了解其结构功能, 对认识整个家族特征具有重要的意义。
我们前期工作以Tec激酶结构域作为“钓饵”蛋白, 利用酵母双杂交技术筛选构建于转录激活结构域(AD)载体的人胎肝cDNA文库, 经营养缺陷选择及诱导筛选及初步鉴定, 发现并确证了一个新的阳性克隆, 对筛库所得基因片段测
 
 
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