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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--枯草芽孢杆菌启动子的改造及其在纳豆激酶表达中的应用
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枯草芽孢杆菌启动子的改造及其在纳豆激酶表达中的应用
 
     论文目录
 
摘要第3-4页
Abstract第4页
第一章 绪论第7-15页
    1.1 基因表达系统概述第7-9页
        1.1.1 原核基因表达系统第7-8页
        1.1.2 真核基因表达系统第8-9页
    1.2 枯草芽孢杆菌蛋白质表达系统及其应用第9-13页
        1.2.1 枯草芽孢杆菌蛋白质表达系统概述第9页
        1.2.2 枯草芽孢杆菌蛋白质表达系统的调控元件第9-13页
    1.3 纳豆激酶概述及其应用第13-14页
        1.3.1 纳豆激酶简介第13-14页
        1.3.2 纳豆激酶的研究进展第14页
    1.4 本论文研究意义与内容第14-15页
第二章 材料与方法第15-24页
    2.1 实验材料第15-18页
        2.1.1 菌株和质粒第15-16页
        2.1.2 主要试剂和仪器第16-17页
        2.1.3 培养基第17页
        2.1.4 主要溶液第17-18页
    2.2 重组蛋白的克隆和表达第18-22页
        2.2.1 细菌质粒及基因组提取第18页
        2.2.2 目的片段及载体的纯化第18页
        2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第18页
        2.2.4 基因扩增第18-19页
        2.2.5 重组质粒的构建第19-21页
        2.2.6 B. subtilis感受态细胞的制备及转化第21页
        2.2.7 重组菌株培养条件第21-22页
    2.3 纳豆激酶液态发酵优化第22页
        2.3.1 纳豆激酶摇瓶发酵培养方法第22页
        2.3.2 种子培养第22页
        2.3.3 5L罐放大发酵培养第22页
    2.4 分析方法第22-24页
        2.4.1 SDS-PAGE电泳分析第22页
        2.4.2 绿色荧光蛋白GFP荧光检测第22页
        2.4.3 氨肽酶AP酶活的检测第22-23页
        2.4.4 纳豆激酶NK酶活测定第23-24页
第三章 结果与讨论第24-39页
    3.1 枯草芽孢杆菌组成型启动子转录活性的比较第24-26页
        3.1.1 含不同启动子重组载体的构建第24页
        3.1.2 不同启动子对重组菌株表达水平的影响第24-26页
    3.2 srfA启动子的理性改造第26-30页
        3.2.1 srfA启动子上游序列对转录活性的影响第26-27页
        3.2.2 P_(srfA)启动子核心区改造对蛋白表达水平的影响第27-28页
        3.2.3 核糖体结合位点RBS改造对蛋白表达水平的影响第28-29页
        3.2.4 氨肽酶的分泌表达第29-30页
    3.3 纳豆激酶的分泌表达第30-34页
        3.3.1 信号肽的选择第30-31页
        3.3.2 srfA启动子的理性改造第31-32页
        3.3.3 P_(srfA)启动子抑制因子结合位点对启动子活性的影响第32-33页
        3.3.4 枯草芽孢杆菌蛋白质表达宿主的选择第33-34页
    3.4 纳豆激酶的液态发酵条件优化第34-39页
        3.4.1 氮源对纳豆激酶酶活的影响第34-35页
        3.4.2 葡萄糖浓度对纳豆激酶酶活的影响第35页
        3.4.3 碳氮比对纳豆激酶酶活的影响第35-36页
        3.4.4 培养温度对纳豆激酶的影响第36页
        3.4.5 接种量对纳豆激酶的影响第36-37页
        3.4.6 产纳豆激酶重组菌在 5L发酵罐中放大培养产酶水平第37-39页
主要结论与展望第39-40页
    主要结论第39页
    展望第39-40页
致谢第40-41页
参考文献第41-45页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第45页

 
 
论文编号BS2607298,这篇论文共45
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